Stabilire un modello di tumore della vescica ortotopica per valutare gli effetti antitumorali di sarna via endovescicale consegnate e monitoraggio della crescita tumorale con l'ecografia e imaging bioluminescente.
Abstract
Presentiamo un nuovo metodo per il trattamento del cancro della vescica con attivante RNA via endovescicale consegnato piccolo (sarna) in un modello murino ortotopico eterotrapianto tumore della vescica. Il modello murino è stabilito dal cateterismo uretrale sotto anestesia generale per via inalatoria. Combustioni chimiche viene quindi introdotto alla mucosa della vescica utilizzando intravescicale soluzione di nitrato d'argento di distruggere lo strato di glicosaminoglicani vescica e permette alle cellule di allegare. Dopo alcuni lavaggi con acqua sterile, cancro della vescica umana KU-7-luc2-GFP cellule sono instillati attraverso il catetere in vescica di sosta per 2 ore. Successiva crescita dei tumori vescicali è confermata e monitorata da ecografia vescicale in vivo e di imaging bioluminescente. I tumori vengono poi trattati per via endovescicale con sarna formulata in nanoparticelle lipidiche (LNPs). La crescita del tumore è monitorata con gli ultrasuoni e la bioluminescenza. Tutte le fasi di questa procedura sono illustrati nel video allegato.
Protocol
Procedure che coinvolgono soggetti animali sono stati approvati dal Animal Care istituzionale e Comitato uso (IACUC) presso l'University of California, San Francisco. 1. Preparazione cellulare La linea di carcinoma della vescica umana cellule KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) viene coltivato in RPMI-1640 integrato con 10% siero fetale bovino e 50 ug / ml di gentamicina. Le colture vengono mantenute a 37 ° C, 5% CO 2 con mezzi cambia ogn…
Discussion
Vi presentiamo un protocollo per l'istituzione di un modello murino ortotopica tumore della vescica xenotrapianto seguito da un trattamento intravescicale dei tumori con sarna LNP formulato che bersaglia il promotore di CIP1/WAF1 p21 (p21) per l'attivazione della trascrizione. 2, 3 I tumori risultanti possono essere confermata e monitorata con immagini e bioluminescenti ultrasuoni vescica. Modelli ortotopica può essere superiore a intraperitoneale, sottocutanea, endovenosa o modelli fornen…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questa ricerca è finanziata dalla vescica AACR Henry Shepard Cancer Research Grant (09-60-30-LI).
Kang, M. R., Yang, G., Charisse, K., Epstein-Barash, H., Manoharan, M., Li, L. An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment. J. Vis. Exp. (65), e4207, doi:10.3791/4207 (2012).