Granulócitos-dependente Blistering pele induzida por auto-anticorpos

Summary

No modelo animal descrito no nosso trabalho, purificou anticorpos IgG contra uma extensão de 200 aminoácidos (aa 757-967) de colagénio VII são injectados repetidamente em ratinhos que reproduzem o fenótipo empolar, bem como a histo-e imunopatológicas características de humano epidermólise bolhosa adquirida (EBA) ¹.

Abstract

Fenómenos auto-imunes ocorrem em indivíduos saudáveis, mas, quando a auto-tolerância falhar, a resposta auto-imune pode resultar na patologia específica. De acordo com os postulados de Witebsky, um dos critérios para o diagnóstico de uma doença auto-imune, como seja a reprodução da doença em animais experimentais por uma transferência passiva de anticorpos. Para epidermólise bolhosa adquirida (EBA), uma doença órgão-específica protótipo auto-imune da pele e membranas mucosas, vários modelos experimentais foram recentemente estabelecida. No modelo animal descrito no nosso trabalho, purificou anticorpos IgG contra uma extensão de 200 aminoácidos (aa 757-967) de colagénio VII são injectados repetidamente em ratinhos que reproduzem o fenótipo empolar, bem como a histo-e imunopatológicas características de humano EBA ^1. Full-blown doença generalizada é normalmente visto 5-6 dias após a primeira injecção e a extensão da doença está correlacionada com a dose administrada de a collagen VII-IgG específico. A lesão tecidual (a formação de bolhas) na EBA experimental é, dependendo do recrutamento e ativação de granulócitos por tecidos ligados auto-anticorpos ^{2, -4.} Portanto, este modelo permite a dissecção da via dependente de granulócitos-inflamatório envolvido no dano de tecido auto-imune, como o modelo reproduz apenas a fase de células T independente da resposta auto-imune eferente. Além disso, o seu valor é sublinhado por uma série de estudos que demonstram o potencial de indução de blister de anticorpos in vivo e investiga o mecanismo da formação de bolhas na EBA ^{1,3, -6.} Finalmente, o modelo vai facilitar grandemente o desenvolvimento de novas terapias anti-inflamatórios em doenças induzidas por auto-anticorpos. No geral, o modelo animal passiva transferência da EBA é um modelo de doença acessível e instrutivo e vai ajudar os pesquisadores a analisar não só a patogênese EBA, mas a resposta fundamental biológica e clinicamenteperguntas essenciais autoimunidade.

Protocol

1. Preparação de Anticorpo Pathogenic

Nota: A purificação e concentração dos anticorpos deve ser realizada no mesmo dia, na forma de anticorpos não são para ser armazenada em glicina 0,1 M pH 2,5-3 (tampão de eluição) durante a noite (ON).

A purificação por afinidade de IgG: usar 25 ml de soro de coelho imune:

1. Descongelar o soro de coelho ON a 4 ° C, mistura-a 1:1 com tampão de corrida (1xPBS) e centrifugar a 1260 ela xg durante 10 min a 20 ° C. Opcionalmente, um passo de filtração com papel de filtro pode ser incluída no processo, após a centrifugação do soro é gordurosa.
2. Enquanto isso, l....

Results

A transferência passiva de anticorpos específicos de antigénio resulta numa doença soprado em ratinhos, assemelhando-se a níveis clínicos, histológicos e imunopatológicas, a ABE humano. Bolhas, crostas, erosões e alopecia desenvolver nas orelhas, focinho, patas, pernas, costas e ao redor dos olhos dos camundongos. Os primeiros sinais clínicos da doença, muito provavelmente aparecer nas orelhas e / ou área de cabeça. Deposição de coelho específico IgG e complemento do mouse C3 é detectado pelo IF direta na junção dermo e.......

Discussion

A transferência passiva de anticorpos em animais experimentais é uma abordagem importante para a demonstração da sua patogenicidade ^{7, -12.} Os modelos animais obtidos por meio deste método, para além de ser a evidência indirecta para autoimunidade ^13, permite a investigação da fase eferente do mecanismo patogénico. O modelo de transferência passiva de anticorpos induzida pela pele de granulócitos-dependente de bolhas Epidermólise bolhosa adquirida (EBA), foi usada para dissecar os mecanismos de dan.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome do reagente	Companhia	Número de catálogo	Comentários
antigénio recombinante			A codificação de plasmídeos para as formas recombinantes do colagénio murino VII estão disponíveis a partir do autor correspondente.
soro de coelho imune	www.eurogentec.com		Tivemos coelhos New Zealand White imunizados com 200 ug de antigénio, 3 vezes em 2 semanas de intervalo. Para isso, usaram os serviços de Eurogentec SA, Bélgica.
Proteína G agarose	Roche Applied Science	11243233001
Camundongos Balb / c	Charles Ri ver Laboratories
Outubro composto, Tissue-Tek	Sakura Finetek	4583	OCT, a temperatura de corte óptima
Cryomold padrão	Sakura Finetek	4557	25 milímetros × 20 mm × 5 mm
Cryomold intermediário	Sakura Finetek	4566	15 mm × 15 mm × 5 mm
Uni-Link Einbettkassette-	R. Langenbrinck	09-0503	Histologia processamento e cassetes de incorporação
Spezial-Tatowierfarbe Schwarz	H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG	71492000	tatuagem pasta
Tatowierzange TZ1	EBECO E. Becker & Co GmbH		tatuagem dispositivo
Heparina	Carl Roth GmbH & Co.	7692,1
De formaldeído a 37%	Carl Roth GmbH & Co.	7386
Cloridrato de cetamina	Sigma-Aldrich Chemie GmbH	K2753-1G
Cloridrato de xilazina	Sigma-Aldrich Chemie GmbH	X1251-1G
PBS estéril	Biochrom	L182-50
câmera digital	Nikon	Coolpix 5400
Seringa conduzida unidade de filtro de 0,45 um	Millipore
Compasso de calibre	Mitutoyo 7309	1667338	Farnell (distribuidor)
folha de pontuação doença			exemplo recintosed