Denne artikkelen beskriver administrasjon av<em> Lux-merket</em> Bakterier til mus og påfølgende<em> In vivo</em> Analyse med IVIS Bioluminescens imaging.
Denne videoen beskriver bruken av hele kroppen bioluminesce imaging (BLI) for studiet av bakteriell handel levende mus, med vekt på bruk av bakterier i genet og celle terapi for kreft. Bakterier presentere en attraktiv klasse av vektor for kreftbehandling, som har en naturlig evne til å vokse fortrinnsvis innen svulster etter systemisk administrasjon. Bakterier konstruert for å uttrykke lux genet kassett tillatelse BLI påvisning av bakterier og samtidig tumor nettsteder. Plasseringen og nivåer av bakterier i tumorer over tid kan lett undersøkes, visualisert i to eller tre dimensjoner. Metoden er egnet for et bredt spekter av bakteriearter og tumor xenograft typer. Denne artikkelen beskriver protokollen for analyse av selvlysende bakterier i subkutane tumor bærende mus. Visualisering av commensal bakterier i mage-tarmkanalen (GIT) av BLI er også beskrevet. Denne kraftige og billige, real-time imaging strategi representanterts en ideell metode for studiet av bakterier in vivo i forbindelse med kreft forskning, spesielt genterapi og smittsomme sykdommer. Denne videoen beskriver prosedyren for å studere lux-merket E. coli i levende mus, som viser at romlig og tidsmessig avlesning oppnåelig utnytte BLI med IVIS systemet.
I sammenheng med genterapi, har bruken av biologiske midler for levering av terapeutiske gener til pasienter vist store løftet 3-5. Som virus, det medfødte biologiske egenskapene bakterier muliggjøre effektiv DNA produksjonstid til celler eller vev, særlig i sammenheng med kreft. Det har blitt vist at bakterier er i stand til homing naturlig til svulster når systemisk administrert resulterer i høye nivåer av replikasjon lokalt, enten eksterne for (ikke-invasive arter) eller innenfor tumorceller (patoge…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne ønsker å erkjenne støtte relevant for dette manuskriptet fra EU-kommisjonen sjuende rammeprogram (PIOF-GA-2009-255466) og den irske Health Research Board (HRA_POR/2010/138). Lux-merket E. coli var en slags gave fra Dr. Cormac Gahan, University College Cork.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |