우리는 마우스의 복부 대동맥의 한 부분이 단지 allogeneic 또는 syngeneic받는 사람의 신장 동맥 아래에 orthotopically 이식되는 기술을 설명합니다. 이 기술은 균일 한 크기의 큰 동맥의 이식이 유리한 것으로 간주되는 연구에 유용 할 수 있습니다.
Abstract
마우스의 문합을 포함하는 혈관 절차는 일반적으로 어렵고 개별 외과 의사의 기술에 크게 의존 할 것으로 생각됩니다. 이 대부분 사실이지만, 이러한 절차의 어려움을 줄이고 재현성을 향상시킬 수 있습니다 중요한 원칙에는 여러가지가 있습니다. Orthotopic 대동맥 이식은 두 엔드 – 투 – 엔드 문합을 포함하기 때문에 이러한 원칙을 배울 수있는 훌륭한 절차이지만, 일관된 성공을위한 좋은 suturing 기술과 선박의 취급이 필요합니다. 이 절차는받는 사람의 기본 대동맥의 분단 다음 기증자 동물의 복부 대동맥의 길이의 조달과 함께 시작합니다. 조달 대동맥은 다음받는 사람 대동맥의 구분 끝 사이에 위치하여 엔드 – 투 – 엔드 문합을 사용하는 곳으로 봉합되어 있습니다. 이 목표를 성공적으로 농도의 높은 수준, 좋은 도구, 침착, 그리고 감사를 필요로 수행하는 방법을 쉽게마우스 vasculature는 혈전증의 결과로 손상 될 수 있습니다. 이러한 중요한 원칙을 배우는 것은 작은 설치류에 미세을 배우고 대부분의 초보자의 시간을 차지하고이야. 이 프로토콜 전반에 걸쳐, 우리는 다음과 같은 중요한 사항을 참조하십시오. 이 모델은 다른 실험 시스템 1-8의 다양한 혈관 질환을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 여기에 표시된 맥락에서,이 가장 많이 후 이식 혈관 질환, 내막 증식증이 allograft 내에서 발생하는 고체 장기 이식의 일반적인 장기 합병증의 연구에 사용됩니다. 모델의 주요 장점은 양적 morphometric 분석을 용이하게하고 이식 혈관은 추가 제어 구 역할을 할 수있는 내생 선박에 인접 자리 잡고 있다는 것입니다. 여기에 표시된 기술은 가장 자주 18~25g 무게 마우스에 사용됩니다. 우리는 C57BL/6J, BALB / CJ, 그리고 C3H/HeJ의 변종을 사용하여 우리의 경험의 대부분을 축적하고 있습니다.
Protocol
1. Presurgical 준비 수술 절차,주의 깊게 수행 방법에 상관없이, 중요한 스트레스의 결과. 이러한 스트레스의 영향을 최소화하고 매장량을 극대화하기 위해 동물을 사용 10,11 전에 최소 72 시간 동안 동식물 사육장에서 유지되어야한다. 수술 도구, 거즈, 그리고 면봉은 살균해야합니다. 이 악기 터치 봉합이나 수술 분야의 만 팁을 제공하는 멸균 장갑을 사용할 필요가 없습니다…
Representative Results
그림 1은 대동맥 이식을 보여줍니다. 흰색 화살표는 봉합 라인을 나타냅니다. 특허 수술이 볼 수 펄스를 표시합니다. 그림 2는받는 사람의 생존은 56일 기간 동안 다음에 한에서 전형적인 실험을 나타냅니다. 한 그룹은 BALB / C 대동맥으로 이식 (C57BL / 6 X FVB) 야생 – 타입받는 마우스로 구성. "KO"지정 다른 그룹은, 24 시간 이내에 이식의 혈전증에 결과 헴 oxygenase-1, 표?…
Discussion
마우스가 잘 immunogenetically 9,12,13 정의되어 있으며, 원하는 경우들이 쉽게 특정 유전자의 표현을 변경하기 위해 조작 할 수 있기 때문에 대동맥 이식의 마우스 모델은 많은 장점을 제공합니다. 도입에 명시된 바와 같이 마우스에 혈관 수술 때문에 선박의 크기 대부분의 모델보다 더 어렵습니다. 같은 대동맥 등의 큰 동맥, 보통 내부 직경 100-200 μm보다 더하지 않습니다, 때문에 이러한 혈관?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH P30 오브라이언 센터 (DK 079337)의 핵심 자원의 지원을받는되었다.
Guo, L., Agarwal, A., George, J. F. Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease. J. Vis. Exp. (69), e4338, doi:10.3791/4338 (2012).