אנחנו מציגים את שיטה חדשה לשמירה על רירית מעי אנושית בתרבות ובניטור של התגובה לסוגים שונים של גירויים על פני לפחות 24 שעות. בשיטה שלנו, את הקוטביות של הרקמה נשמר, מה שמאפשר לגירוי פיסיולוגי דרך מסלול הפסגה.
דגמים אחדים קיימים כיום לדמות מיקרו הסביבה של המעי האנושי המורכב, שבו מגוון רחב של יחסי גומלין יתקיים מציאותי. הומאוסטזיס תקין ישירות תלוי באינטראקציות הללו, כפי שהם מעצבים את סובלנות גרימת תגובה חיסונית נגד אנטיגנים מזון כולו ובו בזמן ההרכבה תגובה חיסונית יעילה כנגד חיידקים פתוגניים לבלוע בטעות עם אוכל.
הומאוסטזיס מעיים נשמר גם דרך אינטראקציות מורכבות שונות בין החיידקים (כולל זני חיידקים מועילים הקשורים לאוכל) והמארח, שמסדירים את הקובץ המצורף / השפלה של ריר, את הייצור של פפטידים מיקרוביאלית על ידי מחסום אפיתל, ו" החינוך "של תאי אפיתל 'ששולט פנוטיפ tolerogenic או immunogenic של ייחודיים, מעיים תושבי תאי הלימפה "אוכלוסיות. אינטראקציות אלה היו עד כה קשים מאוד לשחזר עם מבחני חוץ גופיתאו באמצעות שורות תאים בתרבית או תאי דם היקפיים mononuclear. בנוסף, מודלים עכבר שונים באופן מהותי ברכיבים של רירית המעי (ארגון שכבת ריר, קהילת חיידקי commensal) ביחס למעי האדם. לכן, מחקרים של מגוון רחב של טיפולים שהביאו במרפאות לתנאים חשובים הקשורים ללחץ או פתולוגי כגון תסמונת מעי רגיז, מחלות מעי דלקתיות או סרטן מעי גס היו קשים לביצוע.
כדי לטפל בבעיות אלה, פיתחנו מערכת חדשנית המאפשרת לנו לעורר explants של רירית מעי אדם ששומר עליהם באתרו על ידי מיזוג חיידקי המארח והתגובה חיסונית, באופן קוטבי. גירוי הפסגה מקוטב הוא בעלת חשיבות רבה לתוצאות שהושרו תגובה חיסונית. הוכח שוב ושוב את אותם גירויים שיכולים לייצר תגובות שונות לחלוטין כאשר הם עוקפים את פני הפסגה של EPI המעייםthelium, מגרה את תאי האפיתל basolaterally או לבוא במגע ישיר עם רכיבי propria lamina, מיתוג פנוטיפ מtolerogenic לimmunogenic וגורם לדלקת מיותרת ומוגזמת באזור.
השגנו גירוי מקוטב על ידי הדבקת גליל מערה שתחם את האזור של גירוי על פני הפסגה של הרירית כפי שיפורט בפרוטוקול. אנחנו השתמשנו במודל זה כדי לבחון, בין יתר, השפעות שונות של שלושה זני לקטובצילוס שונים. אנו מראים כי מערכת המודל הזה היא חזקה מאוד כדי להעריך את מאפייני המערכת החיסונית של פרוביוטיקה בתנאים בריאים ומחלה.
הצורך בדגמים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית שבו ניתן לבדוק את הטיפול ברירית מעי אנושי כדין כבר הדגיש ארוך. חוקרים רבים זיהו חפצים ופגמים פוטנציאליים בשניהם תא 5 ומודלי עכבר 6 השתמש עד כה למטרה זו. ואכן, למרות שנתונים פרה מבטיחים לעתים קרובות מתקבלים, אלה רק ל?…
The authors have nothing to disclose.
אנו מודים לאריקה Mileti לתמיכה טכנית מצוינת ואנטוניו די ד"ר Sabatino למתן החמצן לתאים.
מימון: עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מתכנית ה -7 של האיחוד האירופי המסגרת (IBDase, ERC: Dendroworld) וFondazione Cariplo למר ותמיכה על ידי רשת מארי קירי בינלאומית הכשרת ניידות (Cross-Talk, אין הסכם מענק: 21,553-2) כדי KT.
Regeant | Company | Catalog No. | |
Reagents | |||
10X HBSS | Eurocalne | ECM4006XL | |
Peni/Strepto | Lonza | DE17602E | |
Gentamycin | Gibco | 15750-037 | |
DMEM | Lonza | BE12614 | |
FBS-Na | Gibco | 16000-044 | |
100X ITS-X | Gibco | 51500-056 | |
EGF | Tebu-bio | 100-15 | |
L-Glutamine | Lonza | BE17605E | |
Non essential aminoacids 100X | Gibco | 11140-035 | |
NaPyr | Gibco | 11360-039 | |
Materials | |||
Cloning cylinders 6×8 mm | BellCo | 2090-00608 | |
Cloning cylinders 8×8 mm | BellCo | 2090-0080 | |
Cloning cylinders 10×10 mm | BellCo | 2090-01010 | |
Metal grids | Home made | ||
Centre well organ culture plate | BD Falcon | 353037 | |
Surgical glue (Vetbond) | 3M | 1469SB | |
Oxygen Jars | Home made | ||
Oxygen tanks | Air Liquid Sanità |