İnsan bağırsak mukozasının eksplantlar Kültür ve Polarize Uyarım için Yeni Bir Yöntem
Summary
En az 24 saat boyunca çeşitli uyaranlara yanıt kültürü ve izleme insan bağırsak mukozasının korunması için yeni bir yöntem getirmektedir. Bizim yöntem ile, doku kutup apikal yolla fizyolojik bir uyarım sağlayan, korunur.
Abstract
Birkaç model şu anda gerçekçi etkileşimleri çeşitli yer alan karmaşık insan bağırsak mikro-çevre, simüle etmek için var. Aynı zamanda yanlışlıkla gıda ile yutulur patojen mikroplara karşı etkili bir bağışıklık yanıtları montaj yaparken de gıda antijenlerine karşı bütün bir immünolojik tepki neden olan tolerans şekil olarak uygun dengesini doğrudan, bu etkileşimlerin bağlıdır.
Bağırsak homeostasis mukus eki / bozulması düzenleyen Mikrobiyota (gıda ile ilişkili yararlı bakteri suşlar dahil) ve ev sahibi, arasında çeşitli karmaşık etkileşimler aracılığıyla da korunur, epitel bariyer tarafından antimikrobiyal peptidler üretimi, ve "eğitim" nüfus 'benzersiz, gut yerleşik lenfoid hücrelerin tolerojenik veya immünojenik fenotip kontrol' epitel hücreleri. Bu etkileşimler, in vitro tahlillerde ile yeniden oluşturmak için şimdiye kadar çok zor olmuşturkültürlenmiş hücre çizgileri ya da periferal kan tek-çekirdekli hücreleri ya kullanılarak. Buna ek olarak, fare modelleri, insan bağırsak ile ilgili olarak, bağırsak mukozası (mukus tabakası organizasyon, ortakçı bakteri eden) bileşenleri önemli ölçüde farklılık gösterir. Böylece, irritabl bağırsak sendromu, enflamatuar barsak hastalığı veya kolorektal kanser gibi önemli stresle ilişkili veya patolojik durumlar için klinikte getirilmesi için çeşitli tedaviler çalışmalarını gerçekleştirmek zor olmuştur.
Bu sorunları çözmek için, bize bir polarize şekilde, ev sahibi Mikrobiyota ve immün yanıt ile yerinde klima kendi korumak insan bağırsak mukozasının eksplantlarının teşvik sağlayan yeni bir sistem geliştirdi. Polarize apikal stimülasyon sonucu için büyük önem taşımaktadır immün yanıt ortaya çıkardı. Bu tekrar tekrar bağırsak epi apikal yüz atlamak zaman aynı uyaranlara tamamen farklı tepkiler üretebilir gösterilmiştirsentezlenen, basolaterally epitel hücreleri uyararak ya da lamina propria bileşenleri ile doğrudan temas, tolerojenik gelen immünojenik için fenotip geçiş ve bölgede gereksiz ve aşırı enflamasyon neden olur.
Bu yapıştırma mukoza apikal yüzünde stimülasyon alanı olarak protokolde tarif edilecektir ayrılmış bir mağara silindir polarize uyarılması sağlanır. Biz diğerleri, üç farklı Laktobasillerin suşlarının diferansiyel etkileri arasında, incelemek için bu model kullanılır. Bu model sistem sağlıklı ve hastalık koşullarında probiyotiklerin bağışıklık özelliklerini değerlendirmek için çok güçlü olduğunu göstermektedir.
Protocol
Representative Results
Discussion
İnsan bağırsak mukozası için tedaviler geçerli olarak test edilebilir hangi fizyolojik ilgili modelleri olan ihtiyaç uzun vurgulanmıştır. Birçok araştırmacı bu amaçla bugüne kadar kullanılan cep 5 ve fare modellerinde 6 hem de potansiyel eserler ve kusurları belirledik. Umut verici klinik öncesi veriler genellikle elde olsa bile Gerçekten de, bu nadiren önemli klinik fayda çevirmek.
Bu çalışmada açıklanan bir yöntem olup, bir kültür ve pola…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz oksijen odaları sağlamak için mükemmel teknik destek ve Dr Antonio Di Sabatino için Erika Mileti teşekkür ederim.
Finansman: MR ve Fondazione Cariplo ve Marie Curie uluslararası eğitim hareketlilik ağ (Çapraz-Talk, hibe anlaşması No: 21553-2) destek için: Bu çalışma, 7. AB çerçeve programı (Dendroworld IBDase, ERC) hibe tarafından desteklenmiştir KT.
Materials
| Regeant | Company | Catalog No. | |
| Reagents | |||
| 10X HBSS | Eurocalne | ECM4006XL | |
| Peni/Strepto | Lonza | DE17602E | |
| Gentamycin | Gibco | 15750-037 | |
| DMEM | Lonza | BE12614 | |
| FBS-Na | Gibco | 16000-044 | |
| 100X ITS-X | Gibco | 51500-056 | |
| EGF | Tebu-bio | 100-15 | |
| L-Glutamine | Lonza | BE17605E | |
| Non essential aminoacids 100X | Gibco | 11140-035 | |
| NaPyr | Gibco | 11360-039 | |
| Materials | |||
| Cloning cylinders 6×8 mm | BellCo | 2090-00608 | |
| Cloning cylinders 8×8 mm | BellCo | 2090-0080 | |
| Cloning cylinders 10×10 mm | BellCo | 2090-01010 | |
| Metal grids | Home made | ||
| Centre well organ culture plate | BD Falcon | 353037 | |
| Surgical glue (Vetbond) | 3M | 1469SB | |
| Oxygen Jars | Home made | ||
| Oxygen tanks | Air Liquid Sanità |
Referências
- Schuller, S., Lucas, M., Kaper, J. B., Giron, J. A., Phillips, A. D. The ex vivo response of human intestinal mucosa to enteropathogenic Escherichia coli infection. Cell. Microbiol. 11, 521-530 (2009).
- Tsilingiri, K., et al. Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model. Gut. , (2012).
- Tsilingiri, K., Rescigno, M. Should probiotics be tested on ex vivo organ culture models?. Gut Microbes. , (2012).
- Mileti, E., Matteoli, G., Iliev, I. D., Rescigno, M. Comparison of the immunomodulatory properties of three probiotic strains of Lactobacilli using complex culture systems: prediction for in vivo efficacy. PLoS One. 4, e7056 (2009).
- Cencic, A., Langerholc, T. Functional cell models of the gut and their applications in food microbiology–a review. Int. J. Food Microbiol. 141, S4-S14 (2010).
- te Velde, A. A., Verstege, M. A., Hommes, D. W. Critical appraisal of the current practice in murine TNBS-induced colitis. Inflamm. Bowel Dis. 12, 995-999 (2006).
- Senior, P. V., Pritchett, C. J., Sunter, J. P., Appleton, D. R., Watson, A. J. Crypt regeneration in adult human colonic mucosa during prolonged organ culture. J. Anat. 134, 459-469 (1982).
- Browning, T. H., Trier, J. S. Organ culture of mucosal biopsies of human small intestine. J. Clin. Invest. 48, 1423-1432 (1969).
- Besselink, M. G., et al. Probiotic prophylaxis in predicted severe acute pancreatitis: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial. Lancet. 371, 651-659 (2008).
- Lakhdari, O., et al. Identification of NF-kappaB modulation capabilities within human intestinal commensal bacteria. J. Biomed. Biotechnol. 2011, 282356 (2011).
