在活体成像系统（IVIS）的神经侵入性脑炎病毒的检测
Summary
利用荧光素酶和体内成像系统（IVIS）作为一种新型的装置，以确定疾病临床发展发生之前的端点。 IVIS使我们能够实时的可视化入侵的脑炎病毒多天，为今后的研究提供了更精确的疾病模型。它也使我们能够找出潜在的抗病毒药物和疫苗的保护功能，速度比目前使用的动物模型。利用动物个体在多个时间点的能力，确保减少动物的要求，成本和总体发病率疾病的研究更人性化，更科学的方法确保使用的动物。
Abstract
现代影像技术的进步，鼓励进一步发展和完善的方式来完成病毒的研究。最初提出的罗素和伯奇在休谟的3R原则（替代，减少，细化），利用动物模型，在科学研究上不断的压力，寻找新的方法来减少动物的使用量，同时提高科学性，准确性和速度。然而，休谟的校长面临的一个主要挑战是如何确保统计准确，同时减少动物疾病的发病率和总人数的研究。目前疫苗的药效学研究需要大量的动物才能被认为有统计学显着性，往往导致高发病率和高死亡率的端点识别的免疫保护。我们利用在体内成像系统（IVIS）一并萤火虫生物发光酶逐步跟踪由ENCE的中枢神经系统（CNS）的入侵小鼠模型中phalitic病毒。通常情况下，疾病的进展相对缓慢，但病毒复制是快速的，尤其是在中枢神经系统内，并且可以导致一个经常，致命的结果。 TC83 – 吕克·鼻内感染的小鼠后，委内瑞拉马脑炎病毒株的减毒修改，以表达荧光素酶基因，我们能够可视化的大脑内的病毒复制前至少3天的临床疾病症状的发展。脑炎病的一个关键发展端点，我们能够迅速地确定治疗和疫苗的保护，对TC83 – 吕克感染临床症状之前，利用CNS入侵的。通过IVIS技术，我们是能够表现出快速，准确的检测，药物治疗和疫苗，同时减少动物的数量和发病率。
Protocol
1。动物准备动物到达：到达后的动物生物安全2级（ABSL2）设施，让动物至少2天，新的环境适应。在此之后的休息时间，检查动物，以评估他们的健康和整体的物理外观。 利用荧光记者时，重要的是把所有的动物主题上苜蓿免费饮食，以限制GI量的自体荧光和背景信号。 剃须动物：为了提高从颅地区发现的生物发光信号，在成像过程中，所有的动物剃了头。麻醉的动?…
Representative Results
的基因修饰的病毒，TC83荧光素酶，我们看到在生物发光信号强度的增加，作为病毒的复制移动到中央的中枢神经系统（ 图1），从鼻区域。由于高的病毒的复制率，我们期望看到的生物发光信号（ 图2A）的高浓度的取决于载体和动物的免疫反应的载体。我们预计这个信号的增加继续到了顶峰，感染后5-7天之间，在中枢神经系统内的病毒复制高峰（ 图2B）的组?…
Discussion
虽然该协议涵盖了成像方面， 在体内分析，为今后的研究中的一个关键因素，重要的是要认识到生物发光的矢量。我们利用TC83，作为表达的荧光素酶的载体的减毒疫苗株VEEV确保正在生产大量的酶，由于如先前描述的1-4在中枢神经系统中的病毒的高复制率。虽然除了一个第二次基因组启动子和荧光素酶基因的重组病毒进一步衰减结果相比，野生型TC83，这种衰减不出现感染5?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
转化科技UTMB-NIH授予1UL1RR029876，01和艾丽莎普拉瑟她的协助与视频编辑这篇稿子。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| D-Luciferin | |||
| Isoflurane | |||
| Xenogen IVIS System (Spectrum) | Caliper Life Sciences | ||
| XGI-8-gas Anesthesia System | Caliper Life Sciences | ||
| XIC-3 Containment Box | Caliper Life Sciences | ||
| LivingImage 4.0 Software | Caliper Life Sciences | ||
| Telemetry/identification chips | Bio Medic Data Systems | IPTT-300 | Animal ID and Temperature |
| BD Integra 1ml TB syringe with 26 g x 3/8” needle | Fisher Scientific | 305279 | |
| Vet Bond tissue adhesive | Fisher Scientific | NC9259532 | |
| Vetropolycin Ophthalmic Ointment | Webster Veterinary Products | 78444656 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline 1X | Invitrogen | 14190-144 | |
| BMDS Chip Reader | Bio Medic Data Systems | DAS-7007S | |
| DAS-HOST Software | Bio Medic Data Systems | Used to download probe information |
Referências
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Citar este artigo
Poussard, A., Patterson, M., Taylor, K., Seregin, A., Smith, J., Smith, J., Salazar, M., Paessler, S. In Vivo Imaging Systems (IVIS) Detection of a Neuro-Invasive Encephalitic Virus. J. Vis. Exp. (70), e4429, doi:10.3791/4429 (2012).