Пассирования оттенков эмбриональных стволовых клеток человека линий с Трипсин

Summary

В этом видео показано, как в нашей лаборатории регулярно проходы оттенки человеческих линий эмбриональных стволовых клеток трипсином.

Abstract

В этом видео показано, как в нашей лаборатории регулярно проходы оттенки человеческих линий эмбриональных стволовых клеток трипсином. Человека эмбриональные стволовые клетки являются артефактами культуры клеток, и, как правило, приобретают кариотипические аномалии с высокой удвоений популяции. Правильное пассажей имеет важное значение для поддержания здорового, недифференцированной, karyotypically нормальные оттенки человеческих стволовых эмбриональных клеточных культур. Во-первых, расширение культуры промывают в PBS для удаления остатков средств массовой информации и сотовых мусора, то клетки с наложением минимальный объем теплого 0,05% трипсина-EDTA. Трипсин остается на клетки на срок до пяти минут, после чего клетки аккуратно выбили с 2 мл серологические пипетки. Клеточной суспензии, собирается и смешивается с большим количеством оттенков средств массовой информации, то клетки собирают нежные центрифугирования. Инактивированной трипсина СМИ смесь снять, и клетки ресуспендировали в подогретого оттенков СМИ. Соответствующем соотношении разделить рассчитывается (в основном от 1:10 до 1:20), и клетки снова высевали на 1-2 день старые пластины, содержащей монослоя облученного мышиных эмбриональных фибробластов фидерные клетки. Вновь посеянных оттенков культуры пластина не трогать в течение 48 часов, то средства массовой информации меняется каждый день после этого. Важно, чтобы не trpsinize до суспензии отдельных клеток, так как это увеличивает риск появления аномалий кариотипа.

Protocol

Общий Мы рекомендуем оттаивания не более одного образца в данный момент времени, чтобы обеспечить удобство в обращении. Обработчик должен заботиться, чтобы не оставить культур при комнатной температуре и низкой CO2 в течение длительных периодов времени. Все центрифугиро?…

Discussion

В этом видео мы продемонстрировали, как мы обычно оттенки человеческих прохождения линии эмбриональных стволовых клеток в нашей лаборатории. Эффективное и регулярное расщепление и пассажи очень важны для поддержания здоровых человеческих эмбриональных стволовых клеток. Трипсин опосредованны?…

Materials

HuES media 651.5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6.5 ml GlutaMAXTM 6.5 ml NEAA 6.5 ml 2‐mercaptoethanol 0.5ul KO Serum Replacement 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng/mL final) 0.65 ml