Cilt dövme intradermal teslimat DNA aşısı için güçlü ve güvenli bir yoldur. Burada, bir DNA plazmid kodlama EGFP bir laboratuvar fare cilt dövme tarafından teslim edilir ve cilt hücrelerinde EGFP ifadesi ardından konfokal mikroskopi tarafından denetlenir.
Abstract
Nükleik asit tabanlı aşılamanın artan ilgi bir konu, immünolojik önemli antijenleri kodlayan özellikle plazmid DNA (pDNA) 'dir. Mühendislik pDNA aşılar uygulandı sonra, transkripsiyonu ve bağışıklık sistemi tepkiler olabilir immünojen proteinler tercüme edilmiştir. DNA aşıları sunma Birçok yönden araştırılmıştır, ancak her teslimat rotayı kendi avantajları ve tuzaklar vardır. Cilt dövme, güvenli maliyet-etkin ve uygun bir roman tekniğidir. Buna ek olarak, iğne tarafından uygulanan delikler de güçlü bir yardımcı madde olarak hizmet edebilir. Burada, a) plazmid DNA kodlama intradermal teslimat göstermek gelişmiş yeşil flüoresan konfokal mikroskopi kullanılarak cilt hücrelerinde EGFP etkili ifade onaylayın dövme cihazı ve b) kullanılarak bir fare modelinde protein (fK-EGFP).
Protocol
1. Plazmid DNA Saflaştırma DH5α E.coli yetkili hücrelere ökaryotik plazmid DNA kodlaması EGFP (fK-EGFP) Transform. FK boş vektör ayrıca, bir negatif kontrol olarak da kullanılabilir. Kültür ve hasat DH5α E.coli hücreleri ve Qiagen EndoFree Plazmid Arıtma Handbook göre pDNA arındırmak. Filtre pDNA 0.22 mikron PVDF steril filtre ile çözüm ve kullanıma kadar -20 ° C'de saklayın. 2. Dövme Sistem Hazırlama …
Representative Results
509 nm 488 nm ve emisyon zirvesinde bir uyarma zirve ile EGFP ifadesi fare deri hücreleri görülebilir. Yaklaşık 3 × içeren bir DNA 1.875 mikrogram doz, 10 Gönderen plazmid 17 kopya, biz genellikle 2 alana dövme 1 cm 10-20 EGFP sinyalleri görülmektedir. Transfekte edilmiş hücrelerin Bu, nispeten az sayıda bir önceki çalışmada, 3 sonuçları ile uyum içindedir. EGFP ifade (Şekil 1) plazmid EGFP DNA dövme tekniği kullanarak hayvanın deri hücrelerine …
Discussion
Bunun manipülasyon gerektiren, ya canlı veya zayıflatılmış patojen 4 aşılar göstermiyor gibi DNA aşılama geleneksel aşılama stratejileri daha güvenli olarak kabul edilir. Ancak DNA aşılama sonucu teslimat güzergahı üzerinde büyük ölçüde bağlıdır. Deri gibi Langerhans Hücreleri ve dendritik hücreler 1, ve böylece immunojenite ve erişim 5,6 kolaylığı açısından bağışıklama için ideal bir site olarak antijen sunan hücreler, bol miktarda bulunur. Son…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz onların yardım ve teknik destek için İşbirlikçi Bilim, NYUMC Mikroskopisi Core Ofisi'nde Kong Lab ve Dr Yan Deng tüm üyelerine teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma AIDS Araştırma için New York Üniversitesi Merkezi (CFAR, NIH hibe AI027742) adlı bir pilot hibe ile desteklenmiştir.
Chiu, Y., Sampson, J. M., Jiang, X., Zolla-Pazner, S. B., Kong, X. Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery. J. Vis. Exp. (68), e50032, doi:10.3791/50032 (2012).