Summary

DNAワクチンの送達のための新しいアプローチとしてタトゥー皮膚

Published: October 18, 2012
doi:

Summary

皮膚の入れ墨は、皮内送達DNAワクチンへの強力かつ安全な方法です。ここでは、DNAプラスミドエンコードEGFPは実験用マウスの皮膚に刺青で配信されており、皮膚細胞におけるEGFPの発現は、その後共焦点顕微鏡で検査されます。

Abstract

核酸ベースのワクチン接種は、成長、興味のあるトピック、免疫学的に重要な抗原をコードする、特にプラスミドDNA(pDNA比)です。人工のpDNAがワクチンに投与された後、それは転写され、免疫システムからの応答を誘発することができる免疫原性タンパク質に翻訳されています。 DNAワクチンを提供する多くの方法が研究されてきたが、各配信ルートは独自の利点と落とし穴があります。皮膚の入れ墨は、安全で費用対効果の高い、そして便利で斬新な手法です。また、針を招いパンクはまた強力なアジュバントとして役立つかもしれません。ここで、我々は)刺青デバイスを使用してマウスモデルにおけるプラスミドDNAのエンコーディング強化緑色蛍光タンパク質(PCX-EGFP)の皮内送達を実証し、b)の共焦点顕微鏡を用いた皮膚細胞におけるEGFPの効果的な発現を確認。

Protocol

1。プラスミドDNA精製 大腸菌 DH5αコンピテントセルに真核生物のプラスミドDNAエンコードEGFP(PCX-EGFP)を変換します。空のPCXベクトルもまたネガティブコントロールとして使用することもできる。 文化や収穫DH5α 大腸菌細胞およびQiagen EndoFreeプラスミド精製ハンドブックによるとpDNAを清める。 フィルタのpDNA0.22μmのPVDFの滅菌フィルターを通して溶液、使用…

Representative Results

509 nmでの488nmおよび発光ピークの励起ピークとEGFPの発現は、マウスの皮膚細胞で観察することができます。 DNAの1.875μgの用量から、プラスミドの約3×10 17コピーを含む、我々は一般的に2エリアに入れ墨1センチメートルで10月20日EGFPの信号を観測しました。トランスフェクトされた細胞のこの比較的低い数は以前の研究3の結果と一致している。 EGFP発現( 図1)?…

Discussion

それを操作する必要があり、または、ライブまたは弱毒病原体4にワクチンを公開していないとして、DNAワクチンは、従来のワクチン接種戦略よりも安全と考えられている。しかし、DNAワクチン接種の結果は送達経路に大きく依存します。皮膚は、ランゲルハンス細胞、樹状細胞1、従って、免疫原性およびアクセス5,6の容易さの点で予防接種のための理想的なサイト?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は彼らの支援と技術的なサポートのための共同研究、NYUMCの顕微鏡コア、オフィスで香港ラボ博士とヤン鄧小のすべてのメンバーに感謝したいと思います。この作品は、エイズ研究のためニューヨーク大学センター(CFAR、NIHの助成金AI027742)からパイロット助成金によって支えられている。

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalogue Number Comments
pCX-EGFP plasmid DNA Clontech
STEALTH Rotary Tattoo System Worldwide Tattoo Supply STEALTH-L
Tattoo needles Worldwide Tattoo Supply 1207RSB
EndoFree Plasmid Maxi Kit Qiagen 12362
0.22 μm PVDF sterile filter Millipore SLGV013SL
electrical hair trimmer Commercially available
disposable safety razors Commercially available
Silver Sulfadiazine Cream Watson NDC 0591-0810-55
Ketamine HCL NDC 0856-2012-01
Zylazine Sterile Solution NADA 139-236

Referências

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Citar este artigo
Chiu, Y., Sampson, J. M., Jiang, X., Zolla-Pazner, S. B., Kong, X. Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery. J. Vis. Exp. (68), e50032, doi:10.3791/50032 (2012).

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