Porcine हार्ट की Decellularization लिए प्रतिगामी कोरोनरी परफ्यूज़न द्वारा प्रक्रिया
Summary
तेजी से और पूरी प्रतिगामी छिड़काव के माध्यम से एक अक्षुण्ण सुअर का दिल से सेलुलर घटकों को दूर करने के लिए एक विधि का वर्णन है. इस पद्धति का एक विशिष्ट साइट हृदय कोशिकी मैट्रिक्स पाड़ जो कई नैदानिक अनुप्रयोगों में उपयोग के लिए क्षमता है पैदावार.
Abstract
परफ्यूज़न आधारित पूरे अंग decellularization साइट विशेष कोशिकी मैट्रिक्स scaffolds बनाने के लिए, के लिए एक साधन के रूप में ऊतक इंजीनियरिंग के क्षेत्र में हाल ही में ब्याज फायदा हुआ है, जबकि बड़े पैमाने पर पाड़ की देशी वास्तुकला के संरक्षण. तिथि करने के लिए, इस दृष्टिकोण अंग प्रणालियों की एक किस्म में उपयोग किया गया है, हृदय, फेफड़े, और 1-5 जिगर सहित. एक आसानी से सुलभ संवहनी नेटवर्क के बिना ऊतकों के लिए पिछला decellularization तरीकों डिटर्जेंट, एसिड, या आसपास के बाह्य वातावरण 6-8 से सेलुलर और परमाणु उपकरणों को हटाने के लिए एक साधन के रूप में enzymatic उपचार के समाधान के लिए ऊतक के लंबे समय तक जोखिम पर भरोसा किया है. हालांकि, इन तरीकों hinged के समाधान की क्षमता पर प्रभाव के प्रसार के माध्यम से ऊतक तर करने के. इसके विपरीत, अंगों के प्राकृतिक नाड़ी तंत्र के माध्यम से प्रभावी ढंग से छिड़काव प्रसार दूरी और decellularizati की परिवहन सुविधा कमऊतक और ऊतक के बाहर सेलुलर घटकों में एजेंटों पर. के साथ साथ, हम पूरी तरह से कोरोनरी प्रतिगामी छिड़काव के माध्यम से एक बरकरार सुअर का दिल decellularize विधि का वर्णन करता है. प्रोटोकॉल बरकरार दिल की तीन आयामी संरचना के साथ एक पूरी तरह से decellularized हृदय कोशिकी मैट्रिक्स पाड़ (ग ईसीएम) मिले. हमारे विधि एंजाइमों, डिटर्जेंट, और hypertonic और hypotonic rinses के साथ मिलकर एसिड और कोशिकाओं के lysis हटाने में सहायता की एक श्रृंखला का इस्तेमाल किया. प्रोटोकॉल एक ट्रिप्सिन समाधान का इस्तेमाल करने के लिए मैट्रिक्स ट्राइटन X-100 और सोडियम deoxycholate समाधान द्वारा पीछा करने के लिए सेलुलर सामग्री को हटाने में सहायता से कोशिकाओं को अलग. वर्णित प्रोटोकॉल भी 2 से अधिक समय की विस्तारित अवधि के लिए एल / मिनट के छिड़काव की गति का उपयोग करता है. उच्च प्रवाह दर, समाधान ऊतकों को सेलुलर मलबे के प्रदूषण के बिना एजेंट के परिवहन और अनुमति परिवर्तन के साथ मिलकर प्रभावी ऊतक के rinsing सुनिश्चित की. वर्णित विधि विकासशील देशों से सभी परमाणु सामग्री को हटायासुअर का हृदय ऊतक ve, एक साइट विशिष्ट हृदय ईसीएम पाड़ कि आवेदनों की एक किस्म के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
वर्तमान अध्ययन एक सुअर का दिल की लगातार और कुशल decellularization के लिए पद्धति में वर्णित है. प्रोटोकॉल पहले प्रकाशित रिपोर्ट 1 एक संशोधन किया गया है, और अब प्रवाह करने के लिए जोखिम और बढ़ा दबाव है, जो अधिक repeatable ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों के लिए Brogan अतिथि, मिशेल वीवर, और िईद्भस्टेन Lippert स्वीकार करना चाहते हैं. इस अध्ययन के लिए अनुदान NIH अनुदान R03EB009237, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से NIH बायोमेडिकल इमेजिंग और बायोइन्जिनियरिंग के राष्ट्रीय संस्थान और T32HL076124-05 से प्रशिक्षण T32EB001026-06 अनुदान द्वारा प्रदान किया गया.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| Trypsin | Gibco | 15090 | |
| EDTA | Fisher | BP120-500 | |
| NaN3 | Sigma | S2002-500G | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-1L | |
| 10X PBS | Fisher | BP399-20 | |
| Sodium Deoxycholate | Sigma | D6750-500G | |
| Peracetic Acid | Pfaltz and Bauer | P05020 | 35% CAS# 79-21-0 |
| Ethanol | Pharmco | 111000200 | |
| Masterflex Pump Drive | Cole Parmer | SI-07524-50 | |
| Masterflex Tubing | Cole Parmer | 96400-18 | Size 18 |
| Barbed Reducer | Cole Parmer | EW-30612-20 | |
| 4L Beaker | Fisher Scientific | 02-540T |
Referências
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