Messung der Lebensdauer in<em> Drosophila melanogaster</em
Summary
Drosophila melanogaster ist ein leistungsfähiges Modell für die Erkundung der molekularen Grundlagen der Langlebigkeit Regulierung. Dieses Protokoll diskutieren die Schritte bei der Erzeugung eines reproduzierbaren, population-based Messung der Lebensdauer sowie potenzielle Fallstricke und wie man sie vermeidet beteiligt.
Abstract
Altern ist ein Phänomen, dass die Ergebnisse im stationären physiologischen Verschlechterung in nahezu allen Organismen, in denen es untersucht wurde, was zu einer verminderten körperlichen Leistungsfähigkeit und Risiko von Krankheiten erhöht. Individuelle Alterung zeigt sich auf der Ebene der Bevölkerung als eine Zunahme der altersbedingten Sterblichkeit, die oft im Labor wird durch die Beobachtung Lebensdauer gemessen in großen Kohorten von gleichaltrigen Personen. Experimente, um das Ausmaß zu quantifizieren versuchen, die genetische oder umweltbedingte Manipulationen Auswirkungen Lebensdauer in einfachen Modellorganismen haben bemerkenswert erfolgreich gewesen für das Verständnis der Aspekte des Alterns, die über Taxa und für inspirierende neue Strategien zur Verlängerung Lebensdauer und Verhinderung altersbedingter-assoziierten Erkrankungen bei Säugetieren konserviert sind .
Der Essig Drosophila melanogaster, ist ein attraktives Modell für die Erforschung der Mechanismen des Alterns aufgrund seiner relativ kurze Lebensdauer, bequem Tierhaltung und einfache Genetik.Allerdings sind demografische Maßnahmen des Alterns, einschließlich des Alters-spezifische Überleben und Mortalität, außerordentlich anfällig für selbst geringfügige Abweichungen in der experimentellen Gestaltung und Umwelt und die Erhaltung der strengen Laborpraxis für die Dauer des Alterns Experimente erforderlich. Diese Überlegungen, zusammen mit der Notwendigkeit, eine genaue Steuerung des genetischen Hintergrund zu praktizieren, sind essentiell für die Erzeugung robuste Messungen. Tatsächlich gibt es viele bemerkenswerte Kontroversen um Folgerung aus Langlebigkeit Experimente in Hefe, Würmern, Fliegen und Mäusen, die Umwelt oder genetische Artefakte 1-4 wurden verfolgt. In diesem Protokoll beschreiben wir eine Reihe von Verfahren, die über viele Jahre Vermessung Langlebigkeit in Drosophila mit Labor-Fläschchen optimiert wurden. Wir beschreiben auch die Verwendung des dLife Software, die in unserem Labor entwickelt wurde und steht zum Download (erhältlich http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / Software). dLife beschleunigt den Durchsatz und fördert gute Praktiken, indem optimale Versuchsplanung, Vereinfachung fly Handhabung und Datenerfassung und Standardisierung von Daten-Analyse. Wir diskutieren auch die vielen Fallstricke in der Entwicklung, Sammlung und Interpretation der Lebensdauer von Daten, und wir bieten vor, um diese Gefahren zu vermeiden.
Protocol
Representative Results
Discussion
Die hier vorgestellten Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Herstellung reproduzierbare Messungen von erwachsenen Langlebigkeit in Drosophila die anpassungsfähig zur Beurteilung von genetischen, pharmakologischen und Umweltinterventionen ist. Zentrale Aspekte des Protokolls sind sorgfältige Kontrolle der Larven Entwicklungsumgebung, die Minimierung Erwachsenen Stress und minimieren Vorspannung über experimentelle Gruppen und Kontrollen. Außerdem stellen wir die Verwendung des dLife Lebensdauer Experiment …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch Mittel aus dem Ellison Medical Foundation (SDP unterstützt http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp ), NIH K01AG031917 (NJL, http://www.nih.gov/ ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) und NIH R01AG030593 (SDP). Diese Arbeit verwendet die Ressourcen des Drosophila Aging Core (DAC) der Nathan Shock Center of Excellence in der Biologie des Alterns von der National Institute of Aging P30-AG-013.283 (gefördert http://www.nih.gov/ ). Die Autoren möchten die Pletcher Labor für hilfreiche Diskussionen und vor allem Brian Chung für die kritische Durchsicht des Manuskripts danken. Wir möchten Nick Asher und Kathryn Borowicz für die Unterstützung bei der Datenerhebung zu bestätigen.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
| Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
| Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
| Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
| 6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
| Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
| Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
| Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
| Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
| Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
| BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
| Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
| PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
| Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
| Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
| Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
| Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
| Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
| Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
| Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |
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