의 수명 측정<em> Drosophila melanogaster</em
Summary
Drosophila melanogaster는 장수 규제의 분자 기초를 탐험하기위한 강력한 모델 생물이다. 이 프로토콜은 재현, 장수뿐만 아니라 잠재적 인 함정의 인구 기반의 측정 방법과 그들을 피하기 위해를 생성하는 단계에 대해 설명합니다.
Abstract
노화는 감소 물리적 성능을 이끌어가 검사를 마쳤있는 거의 모든 생물의 꾸준한 생리 저하의 결과, 질병의 위험을 증가하는 현상입니다. 개인 노화는 종종 나이에 일치하는 개인의 큰 무리에서 관찰 수명에 의해 실험실에서 측정 나이에 따라 사망에 증가로 인구 수준에서 명단입니다. 범위를 수량화을 추구 실험 간단한 모델 생물의 유전자 나 환경 조작 영향 수명은 수명을 연장하고 포유류 나이 관련 질병을 예방하기위한 taxa에서와 감동을 새로운 전략에 대한 보존 아르 노화의 측면을 이해하는 매우 성공적인하는 방법 .
식초 파리, Drosophila melanogaster는 자사의 상대적으로 짧은 수명, 편리한 축산 및 손쉬운 유전학에 의한 노화의 메커니즘을 연구하기위한 매력적인 모델 생물이다.그러나, 나이 별 생존과 사망 등의 노화의 인구 통계 학적 조치는, 실험 설계 및 환경에도 작은 변화에 매우 민감하며, 노화 실험 기간 동안 엄격한 실험실 관행의 유지 보수가 필요합니다. 함께 유전 배경의주의 통제를 연습 할 필요가있는이 고려, 강력한 측정을 생성하기위한 필수적입니다. 사실, 효모의 수명 실험, 웜, 파리, 환경이나 유전 유물 1-4으로 추적 된 생쥐에서 추론을 둘러싼 많은 중요한 논쟁이 있습니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 실험실 유리 병을 사용하여 Drosophila의 장수를 측정 오랜 세월에 걸쳐 최적화 된 절차의 집합을 설명합니다. 우리는 또한 실험실에서 개발 및 다운로드 (사용할 수 있습니다되었습니다 dLife 소프트웨어의 사용을 설명 http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / 소프트웨어). dLife는 처리량을 가속화하고 즉시 처리 및 데이터 수집을 단순화하고, 데이터 분석을 표준화, 통합 최적의 실험 설계에 의해 좋은 관행을 촉진합니다. 우리는 또한 설계, 수집 및 수명 데이터의 해석에 많은 잠재적 인 함정을 논의 할 것이다, 우리는 이러한 위험을 방지하기위한 조치를 제공합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 제시된 프로토콜은 유전자, 약리, 환경 개입의 평가에 적용 할 수 있습니다 Drosophila에 성인 장수의 재현 측정을 생산하는 방법을 설명합니다. 프로토콜의 중요한 측면을주의 깊게, 애벌레의 개발 환경을 제어하는 성인 스트레스를 최소화하고, 실험 그룹과 통제에서 바이어스를 최소화 등이 있습니다. 우리는 또한 dLife 수명 실험 관리 소프트웨어의 사용을 제시한다. 단순히 각 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 엘리슨 의료 재단 (SDP에서 자금이 지원 된 http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp ), NIH K01AG031917 (NJL, http://www.nih.gov/ ), NIH 5T32GM007315-35 (JR)와 NIH R01AG030593 (SDP). 이 작품은 P30-AG-013283 (노화의 국립 연구소에 의해 자금 지원을 노화의 생물학에 우수의 나단 충격 센터의 Drosophila 노화 코어 (DAC)의 자원을 활용 http://www.nih.gov/을 ). 저자는 원고의 중요한 읽기에 도움이 토론 및 특히 브라이언 정에 대한 Pletcher 연구소 감사드립니다. 우리는 데이터 수집과 지원을 닉 아셀과 캐서린 Borowicz을 인정하고 싶습니다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
| Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
| Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
| Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
| 6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
| Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
| Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
| Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
| Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
| Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
| BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
| Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
| PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
| Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
| Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
| Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
| Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
| Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
| Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
| Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |
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