Medição do Tempo de vida em<em> Drosophila melanogaster</em
Summary
Drosophila melanogaster é um organismo modelo eficaz para explorar a base molecular da regulação da longevidade. Este protocolo irá discutir as etapas envolvidas na criação de um reprodutível, medição de base populacional de longevidade, bem como potenciais armadilhas e como evitá-los.
Abstract
O envelhecimento é um fenômeno que resulta na deterioração fisiológica constante em quase todos os organismos em que foi examinado, levando à redução do desempenho físico e aumento do risco de doenças. Envelhecimento individual se manifesta ao nível da população como um aumento dependente da idade de mortalidade, que é muitas vezes medido em laboratório, observando vida em grandes grupos de indivíduos da mesma idade. Experiências que visam quantificar a extensão em que as manipulações genéticas ou ambientais impacto esperança de vida dos organismos modelo simples foram coroados de êxito para a compreensão dos aspectos do envelhecimento que são conservadas entre taxa e para inspirar novas estratégias para prolongar vida útil e prevenção de doenças associadas à idade nos mamíferos .
A mosca do vinagre, Drosophila melanogaster, é um organismo modelo atractivo para estudar os mecanismos de envelhecimento devido ao seu tempo de vida relativamente curto, a criação conveniente, e genética fáceis.No entanto, medidas demográficas de envelhecimento, incluindo a idade específica de sobrevivência e mortalidade, são extremamente suscetíveis a variações ainda menores em delineamento experimental e meio ambiente, e para a manutenção de práticas estritas de laboratório para a duração dos experimentos de envelhecimento é necessária. Estas considerações, juntamente com a necessidade de praticar o controle cuidadoso do fundo genético, são essenciais para a geração de medições robustos. Na verdade, há muitas controvérsias em torno notáveis inferência a partir de experimentos de longevidade em leveduras, vermes, moscas e ratos que foram traçadas a artefatos ambientais ou genéticos 1-4. Neste protocolo, descrevemos um conjunto de procedimentos que foram otimizados ao longo de muitos anos de medir a longevidade em Drosophila utilizando frascos de laboratório. Descrevemos também o uso do software DLIFE, que foi desenvolvido pelo nosso laboratório e está disponível para download ( http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / software). DLIFE acelera o rendimento e promove as boas práticas, incorporando melhor projeto experimental, simplificar a manipulação mosca e coleta de dados, padronização e análise de dados. Também vamos discutir as muitas armadilhas em potencial no projeto, coleta e interpretação de dados de expectativa de vida, e nós fornecemos medidas para evitar esses perigos.
Protocol
Representative Results
Discussion
O protocolo aqui apresentado descreve um método para produzir medições reprodutíveis da longevidade da Drosophila, que é adaptável para a avaliação de intervenções farmacológicas, genéticos e ambientais. Aspectos cruciais do protocolo incluem controlando cuidadosamente o ambiente de desenvolvimento larval, minimizando o estresse do adulto, e minimizando o viés entre os grupos experimentais e controles. Apresentamos também a utilização do software de gestão DLIFE vida experiência. Por simplesme…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi suportado pelo financiamento do Medical Ellison Foundation (SDP, http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp ), NIH K01AG031917 (NJL, http://www.nih.gov/ ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) e NIH R01AG030593 (SDP). Este trabalho utilizou os recursos do Envelhecimento Drosophila Core (DAC) do Centro de Choque Nathan de Excelência em biologia do envelhecimento financiado pelo Instituto Nacional do Envelhecimento P30-AG-013283 ( http://www.nih.gov/ ). Os autores gostariam de agradecer ao Laboratório Pletcher para discussões úteis e particularmente Brian Chung para a leitura crítica do manuscrito. Nós gostaríamos de agradecer Nick Asher e Kathryn Borowicz para a assistência com a coleta de dados.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
| Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
| Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
| Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
| 6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
| Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
| Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
| Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
| Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
| Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
| BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
| Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
| PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
| Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
| Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
| Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
| Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
| Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
| Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
| Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |
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