Isolamento, coleta e Enriquecimento de bactérias naturais magnetotáticas do Meio Ambiente
Summary
Nós demonstramos um método para recolher bactérias magnetotáticas (MTB), que podem ser aplicadas para águas naturais. MTB podem ser isolados e enriquecidos a partir de amostras de sedimento utilizando uma configuração relativamente simples que aproveita magnetismo da bactéria natural. Isolado MTB pode então ser analisada em detalhe utilizando luz e microscopia eletrônica.
Abstract
Bactérias magnetotáticas (MTB) são microorganismos aquáticos que foram pela primeira vez descritos nomeadamente em 1975 uma das amostras de sedimentos coletados em salinas de Massachusetts (EUA). Desde então MTB foram descobertos em água e sedimentos estratificados-colunas de todo o mundo 2. Uma característica comum a todos MTB é que eles contêm magnetossomos, que são intracelulares, nanocristais ligado à membrana magnéticas de magnetita (Fe 3 O 4) e / ou greigite (Fe 3 S 4) ou ambos os 3, 4. No hemisfério norte, MTB normalmente são atraídos para a extremidade sul de um ímã de barra, enquanto no hemisfério sul geralmente são atraídos para a extremidade norte de um ímã de 3,5. Esta propriedade pode ser explorada durante a tentativa de isolar a partir de amostras ambientais MTB.
Uma das formas mais comuns de enriquecer MTB é a utilização de um contentor de plástico transparente de recolher os sedimentos e água a partir de uma fonte natural,tal como um tanque de água doce. No hemisfério norte, o sul de uma barra magnética é colocada contra a parte exterior do recipiente um pouco acima do sedimento na interface sedimento-água. Depois de algum tempo, a bactéria pode ser removido do interior do recipiente perto do magneto com uma pipeta e, em seguida, enriquecido ainda mais por meio de um capilar de pista 6 e um magnete. Uma vez enriquecido, a bactéria pode ser colocado sobre uma lamela de microscópio, utilizando um método de gota pendente e observados num microscópio de luz, ou depositado sobre uma grelha de cobre e observadas por microscopia electrónica de transmissão (TEM).
Usando este método, isolado MTB pode ser estudada microscopicamente para determinar características tais como o tipo de comportamento de natação, e número de flagelos a morfologia das células, das células, a forma dos cristais magnéticos, número de magnetossomos, o número de cadeias de magnetossomos em cada célula, a composição de os cristais nanomineral e presença de vacúolos intracelulares.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bactérias magnetotáticas não são necessariamente encontrados em cada ambiente aquático 8, mas quando elas ocorrem, eles podem ser encontrados na ordem de 100 – 1000 células por mililitro 2. A fim de observar o MTB microscopia óptica, você vai precisar de cerca de 50 bactérias / ml em sua amostra 8. Se não houver nenhum ou poucos MTB em sua amostra, então você precisa selecionar um novo site ambiental para coletar suas amostras ou você terá de tentar uma ou mais das técnica…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi suportado por concessões do National Science Foundation EUA (EAR-0920299 e 0745808-EAR); National Science Foundation EUA Leste Asiático e Pacífico Verão Institutos, a Sociedade Geológica da América Programa Bolsa Pesquisa e os Subsídios para Pesquisa de Pós-Graduação Alumni e Bolsa da Universidade Estadual de Ohio. Gostaríamos de agradecer ao editor e dois revisores anônimos por seus comentários perspicazes.
Materials
| Item Name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Glass slides | Fisher Scientific | S95933 | |
| Glass Pasteur pipets | Fisher Scientific | 13-678-6A | |
| O-ring | Hardware store | ||
| Cover slips | Fisher Scientific | 12-542B | |
| Bar magnet | Fisher Scientific | S95957 | |
| Container | Any | Any plastic or glass container that can hold at least 0.5 L and can be sealed | |
| Cotton | Any | ||
| Microscope with 60X dry lens | Zeiss | A 60X dry lens is not absolutely necessary, but this gives a high NA without using oil | |
| Diamond pen | Fisher Scientific | 08-675 | |
| 0.22 mm filter | Fisher Scientific | 09-719C | |
| 1 ml syringe | Fisher Scientific | NC9788564 | |
| Microcentrifuge tubes | Fisher Scientific | 02-681-320 | |
| Formvar/Carbon 200 mesh, copper grids | Ted Pella Inc. | 01800 | |
| Uranyl acetate | Ted Pella Inc. | 19481 | |
| Tecnai Spirit TEM | FEI | ||
| Tecnai F20 S/TEM | FEI |
Referências
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