Medição da alodinia táctil em um modelo murino de prostatite bacteriana

Resumo

Infecção da próstata pode ser um fator que contribui na mediação dor pélvica na prostatite crônica. Descreve-se o processo para a preparação do inoculo bacteriano padronizado, a instilação de bactérias para dentro da uretra de ratos machos e metodologia para medir a alodinia táctil em ratos ao longo do tempo.

Resumo

Escherichia coli uropatogênica (UPEC) são patógenos que desempenham um papel importante em infecções do trato urinário e prostatite bacteriana ^1. Temos mostrado recentemente que UPEC têm um papel importante na iniciação da dor pélvica crônica ^2, uma característica de prostatite crônica / síndrome de dor pélvica crônica (CP / CPPS) ^3,4. Infecção da próstata por UPEC clinicamente relevante pode iniciar e estabelecer a dor crónica, através de mecanismos que podem envolver danos nos tecidos e a abertura dos mecanismos de auto-imunidade ^5.

Um desafio para a compreensão da patogénese de UPEC na próstata é a relativa inacessibilidade da glândula da próstata a manipulação. Utilizamos um método previamente descrito infecção intra-uretral ⁶ para proporcionar uma estirpe clínica de UPEC em ratinhos macho estabelecendo assim uma infecção ascendente da próstata. Aqui, descrevemos nossos protocolos para padronizar a bacterial inoculo ^7, bem como o procedimento para a cateterização anestesiados ratos machos por instilação de bactéria.

CP / CPPS é essencialmente caracterizada pela presença de alodinia táctil ^4. Testes de comportamento foi baseada no conceito de hiperalgesia cutânea resultante referidas ^8-10 dores viscerais. Um foco irritável em tecidos viscerais reduz o limiar da dor cutâneas permitindo uma resposta exagerada a normalmente não estímulos dolorosos (alodinia). Aplicação de uma força normal para a pele, em resultado respostas anormais que tendem a aumentar com a intensidade da dor visceral subjacente. Descrevemos metodologia em NOD / ShiLtJ ratos que utilizam fibras de von Frey para quantificar alodinia táctil ao longo do tempo em resposta a uma única infecção com bactérias UPEC.

Protocolo

1. Bactérias Preparação para inoculação em camundongos

A seguir, deve ser feita sob condições assépticas.

1. Tome um 17 x 100 milímetros tubos de polipropileno com tampas e adicionar 3 ml de caldo de Luria frescas (LB) de mídia. Utilizando pontas autoclavadas, levará algum estoque de glicerol congelado da estirpe de bactérias CP1 ² e transferir uma pequena quantidade da cultura para o tubo contendo os meios LB. Substituir a tampa do tubo de modo a que o oxigénio é ainda capaz de entrar no tubo - a cultura tem de crescer em condições aeróbias. Colocar o tubo de a 37 ° C numa incubadora com agitação a 220 rpm durante a no....

Resultados

Examinámos NOD / ShiLtj e C57BL/6J ratinhos macho para a presença de dor crónica após infecção bacteriana. Ratos machos (5-7 semanas de idade) foram instilados com solução salina ou de bactérias no interior da uretra (Figura 1). Estimulação mecânica da área pélvica com filamentos de von Frey de camundongos C57BL/6J instilados com solução salina e ratinhos C57BL/6J UPEC infectados resultou numa resposta de frequência que não se alterou durante o curso de 28 dias da experiência (Figura 1).

Discussão

Infecção da próstata do rato com UPEC permite a modelagem em vivo de eventos que podem estar envolvidos na patogénese da prostatite bacteriana, CP / CPPS ou como um evento de predisposição em inflamação crónica. Os métodos descritos para a preparação bacteriana e empate instilação em cima de um grande corpo de literatura sobre modelos UPEC em infecção do trato urinário feminino ^7,14. O modelo tem grande aplicabilidade para o estudo da patogênese, testando vacinas candidatas potenciais e mecanismos de.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nome do reagente	Companhia	Número de catálogo
Os tubos de cultura	BD Falcon	352059
LB Miller	EMD	EM1.10285.0500
Tubos de centrífuga Nalgene	Thermo	3118-0050
Isoflurano	Butler Schein	NDC 11695-6776-1
30G agulha cateter	Hamilton	91030
PE10 tubulação	BD intramedic	427400
Os filamentos de von Frey	Stoelting	58025-31