Um modelo murino de cicatrização de feridas cutâneas que podem ser utilizados para avaliar compostos terapêuticos em contextos fisiológicos e patológicos.
A cicatrização de feridas e reparação são os processos biológicos mais complexas que ocorrem na vida humana. Após lesão, múltiplos caminhos biológicos se tornam ativadas. Cicatrização de feridas prejudicada, o que ocorre em pacientes diabéticos, por exemplo, pode levar a resultados desfavoráveis graves, como amputação. Existe, portanto, um impulso crescente de desenvolver novos agentes que promovem a cicatrização de feridas. O teste destes foi limitado a grandes modelos animais, tais como porcos, os quais são muitas vezes impraticável. Ratos representam o modelo pré-clínico ideal, uma vez que são económicos e passíveis de manipulação genética, a qual permite uma investigação mecanicista. No entanto, a cicatrização de feridas num ratinho é fundamentalmente diferente da dos seres humanos, uma vez que ocorre primeiramente através de contração. O nosso modelo murino supera esta incorporando uma tala em torno da ferida. Por imobilização da ferida, o processo de reparação é, então, dependentes de epitelização, proliferação celular e angiogênese, que de perto espelhar aprocessos biológicos de cicatrização de feridas humanas. Embora requerendo consistência e cuidado, este modelo murino não envolvem técnicas cirúrgicas complicadas e permite o teste de agentes promissores robusta que pode, por exemplo, promover a angiogénese ou inibir a inflamação. Além disso, cada rato actua como o seu próprio controlo de duas feridas são preparados, possibilitando a aplicação de tanto o composto de teste e o veículo de controlo no mesmo animal. Em conclusão, foi demonstrado um modelo prático, fácil de aprender e robusta de cicatrização da ferida, o que é comparável com a dos seres humanos.
Cicatrização de feridas prejudicada é responsável pela morbidade e mortalidade em todo o mundo significativo, isto é particularmente verdadeiro para pessoas que sofrem de diabetes mellitus 1,2. Nos seres humanos, a cicatrização de feridas é um processo contínuo de processos, em que há sobreposição significativa 3. Imediatamente seguintes processos ferindo, inflamatórias são iniciadas. As células inflamatórias liberam fatores que incentivam os processos de proliferação celular, migração e angiogênese. Depois de re-epitelização e formação de tecido novo, há uma fase de remodelação, que implica tanto a apoptose ea re-organização das proteínas da matriz, como o colágeno.
A complexidade da cicatrização da ferida não pode actualmente ser replicado in vitro, e isto requer o uso de modelos animais. Até à data, os estudos de cicatrização de feridas têm-se limitado a modelos grandes animais, tais como porcos, para assegurar que os processos de cura são equivalentes e comparáveis aos seres humanos. No entanto, usando o grande animals de tais estudos pode ser difícil para a casa e nem sempre são 4 prático. O rato de laboratório representa um modelo animal económico que pode ser facilmente manipulado geneticamente para investigação mecanicista 5-7. No entanto, as feridas cicatrizar murino diferente ao ser humano, principalmente devido ao processo de contracção 8. Isto é, em parte, devido a uma grande camada de músculo estriado subcutânea chamado o panículo carnoso que é praticamente ausente em humanos. Em ratinhos, esta camada muscular permite que a pele se mover independentemente dos músculos profundos e é responsável pela rápida contracção da pele a seguir ferimento.
Para superar esta limitação, a cicatrização de feridas de murino pode ser adaptado para replicar a cicatrização de feridas humana por utilização de uma tala (Figura 1) 8,9. Neste vídeo demonstramos o modelo murino ferida splinted que elimina a contração da ferida e mais se aproxima dos processos humanos de re-epithelialização e formação de tecido novo. Neste modelo, duas excisões de espessura total, que incluem o panículo carnoso são criadas no dorso, uma em cada lado da linha média do rato. A tala de silicone é colocado em torno da ferida, com o auxílio de adesivo e, em seguida, a tala protegido com suturas interrompidas. Cada rato actua como o seu próprio controlo, com uma ferida a receber tratamento e do outro veículo de controlo, reduzindo assim o número de animais. Após aplicações tópicas, um curativo oclusivo transparente é aplicada. O penso pode ser removido quando necessário para outras aplicações tópicas e / ou para a medição da área da ferida 10,11. Após a conclusão de experiências, o fechamento da ferida, a arquitectura morfológica e grau da neovascularização pode ser avaliada por imuno-histoquímica. Este económico e fácil de realizar modelo também pode ser utilizado para avaliar a cicatrização de feridas, no contexto da diabetes mellitus ou outros pathophysiologies.
Este é um modelo experimental murino de cicatrização de feridas cutâneas. Uma característica importante deste modelo é o uso de tampões de silicone para evitar a contracção da ferida de modo que pode ocorrer a re-epitelização e formação de tecido de novo, tornando-se o processo semelhante ao que ocorre em seres humanos. Este modelo é versátil e pode ser utilizado para avaliar a cicatrização de feridas em ambientes fisiológicos e patológicos (por exemplo, diabetes mellitus). O modelo pode tamb…
The authors have nothing to disclose.
Os autores gostariam de agradecer o apoio financeiro do Conselho Nacional de Saúde e Pesquisa Médica (NHMRC) da Austrália (Project Grant ID: 632512). Louise Dunn foi apoiada por um NHMRC início de carreira Fellowship e Christina Bursill por um Heart Foundation Career Development Fellowship Nacional.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
Press-to-seal silicone sheeting 0.5 mm thick | Invitrogen | P18178 | Cut into “donuts” with external diameter of 1cm external, 0.5 cm internal diameter |
Biopsy punch 5 mm | Steifel | BC-B1-0500 | To outline wound area to be excised |
Vannas scissors 8.5 cm curved | World Precision Instruments | 501232 | For wound incision and excision |
Dumonte #7b forceps, 11 cm | World Precision Instruments | 501302 | To grip skin when creating incision and excising skin |
Graefe forceps, serrated 10cm | World Precision Instruments | 14142 | To help attach silicone splint to skin |
Needle holder, smooth jaws, curved, 12.5 cm | World Precision Instruments | 14132 | |
Malis forceps, smooth, straight, 12 cm | Codman and Shurtleff, Inc (J&J) | 80-1500 | To suture the silicon rings to the skin |
Ruler, 0.5 mm gradation | n/a | ||
Calipers 0.25 mm gradation | Duckworth and Kent | 9-653 | To measure wound area |
Opsite FlexiFix transparent adhesive film. 10 cm x 1 m | Smith & Nephew | 66030570 | |
Rimadyl (Carprofen) | Pfizer | 462986 |