खाली पेट के गैर मोटे मधुमेह का उपयोग कर एक चूहे में मूल्यांकन [<sup13></sup> सी] octanoic एसिड सांस परीक्षण

Summary

खाली पेट के साथ एक गैर इनवेसिव निर्धारण [<sup13></sup> सी] octanoic औरत इशारा LtJ चूहों में ट्रैकिंग gastroparesis के लिए एसिड सांस परीक्षण.

Abstract

चूहों में गैस्ट्रिक खाली अध्ययन करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया तकनीकों जानवरों और भोजन ^1,2 के शवपरीक्षा वसूली की हत्या की आवश्यकता के बाद एक ही जानवर में गैस्ट्रिक खाली परिवर्तन का पालन करने में असमर्थता द्वारा सीमित किया गया है. इस दृष्टिकोण अनुदैर्ध्य अध्ययन से बचाता है उम्र और रोग की प्रगति के साथ खाली पेट में परिवर्तन का निर्धारण. आमतौर पर इस्तेमाल किया है. ^[13 सी] octanoic ³ मनुष्यों के लिए एसिड सांस परीक्षण ^4-6 चूहों और चूहों ⁷ में उपयोग के लिए संशोधित किया गया है और हम पहले से पता चला है कि इस परीक्षण दवाओं के जवाब में और के दौरान विश्वसनीय और खाली पेट में परिवर्तन करने के लिए उत्तरदायी है मधुमेह रोग प्रगति ^8. इस वीडियो प्रस्तुति में सिद्धांत और इस संशोधित परीक्षा के व्यावहारिक कार्यान्वयन में समझाया गया है. जैसा कि पिछले अध्ययन में, इशारा LtJ चूहों का इस्तेमाल कर रहे हैं, प्रकार 1 मधुमेह ⁹ के एक मॉडल. इन चूहों के एक अनुपात gastroparesis के लक्षण विकसित, Diabet की एक जटिलतातों ¹⁰ पेट के यांत्रिक बाधा के बिना देरी खाली पेट से होती है.

इस पत्र दर्शाता है कि कैसे परीक्षण के लिए चूहों को प्रशिक्षित करने के लिए, कैसे परीक्षण भोजन तैयार करने के लिए और 4 घंटा गैस्ट्रिक खाली डेटा और प्राप्त डेटा का विश्लेषण करने के लिए कैसे प्राप्त. कार्बन आइसोटोप वर्तमान अध्ययन में इस्तेमाल किया विश्लेषक से हवा के नमूनों का स्वत: नमूना लेने के लिए एक ही समय में 12 चूहों के लिए उपयुक्त है. इस तकनीक को खाली पेट के अनुदैर्ध्य पालन मधुमेह या अन्य लंबे समय से चली आ रही बीमारियों के साथ बड़े चूहों के समूह से की अनुमति देता है.

Introduction

इस पांडुलिपि तकनीकी और methodological चूहों में गैस्ट्रिक खाली की गैर इनवेसिव माप में शामिल विचार का वर्णन करता है. प्रोटोकॉल का पालन करके यहाँ वर्णित, जांचकर्ताओं और मज़बूती reproducibly गैस्ट्रिक में परिवर्तन करने के लिए इस रोग के विकास के कारण खाली का पालन कर सकते हैं, खाली पेट पर औषधीय एजेंटों के प्रभाव का अध्ययन करने और खाली पेट के अंतर्निहित रोग या ^6,8 दोष के इलाज के लिए जवाब का पालन ^{करें, 11,12.} पिछले प्रकाशनों में, ¹³ सी के आवेदन octanoic एसिड सांस परीक्षण मनुष्य और जानवरों ^3,8 में खाली पेट को मापने का एक उपयोगी तरीका होना दिखाया गया था इस पत्र में विस्तार से वर्णन है., 6 से 8 से अधिक विश्वसनीय आंकड़े प्राप्त करने के लिए आवश्यक प्रक्रियाओं मधुमेह के साथ चूहों में एक खाली पेट के अनुदैर्ध्य अध्ययन के लिए आवश्यक महीनों. इस प्रोटोकॉल के बाद जब पहले प्रकाशित तरीकों की तुलना में लाभ है कि अन्वेषक डेटा obtaine आश्वासन दिया जा सकता हैविश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य हो जाएगा. इसके अलावा, इकट्ठा करने और गैस के नमूनों का विश्लेषण करने के लिए स्वचालित प्रणाली यहाँ वर्णित पशुओं की संख्या बढ़ जाती है कि एक अध्ययन में एक साथ पालन कर सकते हैं. कुल मिलाकर, इस कागज के लक्ष्य के लिए महत्वपूर्ण कारक है कि परीक्षण के लिए चूहों के habituation और कि प्राप्त परिणामों में परिवर्तनशीलता को कम बनाए रखने की पहचान है.

के लिए खाली पेट के vivo माप में, चूहों को रात भर उपवास कर रहे हैं और लगातार airflow के साथ पारदर्शी प्लास्टिक परीक्षण कक्षों में डाल दिया. बाद चूहों ट्यूबों को आदत हो, आधारभूत ¹³ सीओ exhaled _{2 के} स्तर को निर्धारित कर रहे हैं और airflow तदनुसार समायोजित. अगला, हम एक परीक्षण ¹³ सी लेबल octanoic एसिड के साथ मिश्रित अंडे की जर्दी से मिलकर भोजन प्रशासन. क्योंकि चूहों उपवास और प्रशिक्षित किया जाता है, वे आम तौर पर 2 मिनट के भीतर परीक्षण भोजन खाने. प्रशासित octanoic एसिड पेट में अवशोषित नहीं है लेकिन ग्रहणी में लिया जाएगा¹³ ₂ सीओ, जो जारी है और exhaled में जिगर में metabolized हो जाएगी, आसपास की हवा में ¹³ सीओ ₂ के एक संवर्धन में जिसके परिणामस्वरूप. हवा के नमूनों को निर्धारित समय के अंतराल पर एकत्र कर रहे हैं और कार्बन आइसोटोप विश्लेषक से विश्लेषण कर रहे हैं. दर सीमित इस पूरी प्रक्रिया में कदम खाली पेट और ¹³ के फेफड़े उत्सर्जन सीओ ₂ सीधे नामक भोजन के खाली पेट के साथ मेल खाती है.

1 चित्रा गैस्ट्रिक खाली तंत्र के योजनाबद्ध. रात भर उपवास के बाद, चूहों पारदर्शी उन्हें स्थानांतरित करने के लिए और करने के लिए स्वतंत्र रूप से बारी की अनुमति कक्षों में रखा जाता है. एक इनलेट ट्यूब ताजा और लगातार हवा बाढ़ की अनुमति देता है और एक दुकान आइसोटोप विश्लेषक के लिए सुराग के लिए ^{13 C-12} उपायमें सी अनुपात सांस exhaled. चैम्बर भी ^[13 सी] एसिड octanoic युक्त भोजन के वितरण के लिए एक केंद्रीय पोर्ट है.

Protocol

1. प्रशिक्षण और चूहे के habituation विश्लेषण करने के लिए पहले, लगातार airflow के साथ 2-4 घंटे के लिए परीक्षण कक्षों में सभी चूहों के क्रम में उन्हें परीक्षण की स्थिति के लिए अभ्यस्त करना डाल दिया. यह स्पष्ट रूप से त?…

Representative Results

एक प्रतिनिधि तीन अलग चूहों से डेटा सेट चित्रा 2 में दिखाया गया है. काले ग्राफ सामान्य खाली पेट के साथ एक माउस से डेटा बिंदुओं का प्रतिनिधित्व करता है. यह 13 सी कि exhaled प्रति घंटे प्रशासित खुराक सम?…

Discussion

वर्णित तकनीक के साथ साथ दोहराया और चूहों में ठोस खाली पेट के vivo माप में गैर इनवेसिव के लिए अनुमति देता है. इस प्रणाली के लाभ यह है कि जानवरों माप चैम्बर में नहीं रोका जाता है, उन्हें स्थानांतरित कर?…

Materials

NAME	COMPANY	CAT NUMBER	COMMENTS
A source of constant air-supply, flow as well as composition	central air supply in the research facility
130 ml sampling chamber that has air inlet, air outlet, and food administration opening Plastic tubes for air supply	In-house built
Octanoic acid	Cambridge isotope laboratories (Andover, MA)	CLM-293-1
To prepare the egg meal: small beaker 50 ml plastic tube Bunsen burner egg spatula	Any supplier		Try to be consistent with the egg supplier since the nutritional content and palatability of the eggs can affect ingestion and gastric emptying of the meal
Carbon dioxide isotope analyzer	Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA)