Osmotique Drug Delivery à hindlimbs ischémiques et la perfusion de la vascularisation avec Microfil pour Micro-en tomodensitométrie
Summary
Nous montrons ici l'<em> In vivo</em> Insertion d'une pompe osmotique pour la livraison locale de médicament constant et la création d'ischémie des membres postérieurs dans un modèle de souris. En outre, le système vasculaire des membres postérieurs est perfusé avec Microfil, un agent radio-opaque de silicone, pour se préparer à micro-tomographie par ordinateur (micro-TDM).
Abstract
La recherche préclinique dans des modèles animaux de la maladie artérielle périphérique joue un rôle vital à tester l'efficacité des agents thérapeutiques visant à stimuler la microcirculation. Le choix de la méthode de prestation de ces agents est importante parce que la voie d'administration affecte profondément la bioactivité et l'efficacité de ces agents 1,2. Dans cet article, nous démontrons comment administrer localement une substance dans les membres postérieurs ischémiques en utilisant une pompe osmotique cathétérisé. Cette pompe peut délivrer un volume fixe de solution aqueuse continue pendant un temps donné. Nous vous présentons également notre modèle murin d'ischémie des membres postérieurs unilatérale induite par la ligature de l'artère fémorale commune proximale à l'origine de la fémorale profonde et les artères epigastrica dans la patte arrière gauche. Enfin, nous décrivons la canule dans vivo et la ligature de l'aorte abdominale sous-rénale et la perfusion de la vascularisation des membres postérieurs avec Microfil, un agent de casting radio-opaque de silicone. Microfil peut perfuser et remplir la totalité du lit vasculaire (artériel et veineux), et parce que nous avons ligaturé le conduit vasculaire majeur pour la sortie, l'agent peut être conservé dans le système vasculaire pour l'avenir imagerie ex vivo avec l'utilisation de petit spécimen micro-CT 3 .
Introduction
La maladie artérielle périphérique (MAP) est une maladie athéroscléreuse qui provoque un apport sanguin insuffisant dans les jambes 4. Elle affecte de 8 à 12 millions d'Américains, et les traitements médicaux actuels offrent seulement un soulagement limité de 5,6. Agents thérapeutiques novateurs qui améliorent la circulation sanguine dans les jambes ne seraient pas seulement contenir la progression de la maladie, mais aussi d'améliorer la qualité de vie. L'incidence de la PAD est plus élevé chez les personnes âgées de plus de 50 ans, la pharmacothérapie afin local est une modalité de traitement plus souhaitable parce que l'insuffisance rénale et hépatique souvent observée chez les patients plus âgés peuvent diminuer le métabolisme des médicaments et augmenter les effets secondaires de l'administration systémique.
Ainsi, nous avons créé un modèle murin de la PAD pour examiner si les agents administrés localement soulager l'ischémie des membres postérieurs en favorisant l'angiogenèse et le remodelage microvasculaire. Plus précisément, nous avons utilisé une pompe osmotique cathétérisé à délivrer en permanence l'agent thérapeutique à l'muscle de la cuisse de la souris ischémique. Grâce à notre système de livraison, nous avons pu maintenir les concentrations optimales de la drogue dans l'environnement local, cette approche permet de bioactivité de médicament approprié, permet d'éviter les effets secondaires possibles systémiques, et de surmonter l'inconvénient d'accès local de drogue limitée associée à l'administration systémique. En outre, afin de déterminer si des agents administrés localement promouvoir revascularisation, nous avons utilisé coulée de pointe et des techniques d'imagerie haute définition qui permettent la quantification des changements dans le système microvasculaire. Collectivement, la combinaison des méthodes utilisées dans cet article de vidéo est utile dans des études précliniques afin d'aider à la compréhension de revascularisation pharmacologiquement induite chez les patients PAD 7-9.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous présentons ici une méthode pour la livraison de drogue / substance osmotique dans un modèle murin d'ischémie des membres postérieurs. En outre, nous décrivons une technique de moulage dans lequel nous avons utilisé Microfil pour produire une reconstruction 3D pour l'analyse du réseau vasculaire.
Le niveau ou la gravité de l'ischémie varie selon l'endroit où la ligature / excision artérielle est faite. Nous avons créé une double ligature de l'artère fé…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier Keith Anderson Michel de la petite installation d'imagerie animale MD pour son aide technique avec micro-imagerie CT, Edward TH Yeh, MD, de l'assistance chirurgicale et Rebecca Bartow, PhD, de l'assistance éditoriale. Ce travail a été financé en partie par l'American Heart Association.
Materials
| Reagent/Material | |||
| Surgical tools | Fine Science Tools | Type: Tool | |
| Puritan sterile cotton swabs | Fisher Scientific | 22-029-499 | Type: Tool |
| Betadine (povidone-iodine) | Fisher Scientific | 19-065534 | Type: Reagent |
| 70% Alcohol pads | Fisher Scientific | NC9926371 | Type: Reagent |
| Phosphate buffered saline | Lonza | 17-516F | Type: Reagent |
| 6-0 prolene suture | Cardinal Health | 8709 | Type: Tool |
| 8-0 prolene suture | Cardinal Health | 2775 | Type: Tool |
| Depilatory cream | Nair | Type: Tool | |
| Osmotic pump | ALZET | 1002 | Type: Tool, 14 day release |
| Vinyl catheter | ALZET | 7760 | Type: Tool |
| Heparinized saline (0.9%) | Baxter | 2B0944 | Type: Reagent |
| Neutral buffered formalin | Richard-Allan Scientific | 5705 | Type: Reagent |
| Microfil (silicone rubber contrast agent) | Flowtech | MV-112 | Type Reagent, Microfil White |
| Cal-Ex II (formic acid solution) | Fisher Scientific | CS511-1D | Type: Reagent |
| Buprenex | CIII | 7571 | Type: Analgesic |
| Bupivicaine | Hospira, Inc. | 381 | Type: Analgesic |
| Equipment | |||
| Dissecting microscope | Carl Zeiss Microimaging | Zeiss Stemi 2000-C | Type:Equipment |
| Laser Doppler perfusion imager | Perimed Inc. | Periscan PIM3 | Type:Equipment |
| Micro-CT imaging system | GE Healthcare | Explore Locus SP | Type:Equipment |
Referências
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