Photothrombotic 국소 빈혈 : 마우스 스트로크 연구를위한 최소 침습 및 재현성 광화학 대뇌 피질의 병변 모델
Summary
Photothrombosis 매우 재현성 방식으로 관심 분야의 작은 잘 구분 경색을 유도하기위한 빠르고, 최소 침습 기술입니다. 그것은 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.
Abstract
photothrombotic 치기 모델은 이전에 주입 빛에 민감한 염료의 사진 활성화의 수단으로 주어진 대뇌 피질의 영역 내에서 허혈성 손상을 유발하는 것을 목표로하고있다. 조명에 따라 염료 활성화 중항 산소를 생성합니다 후속 혈소판 응집 결국 국부적으로 혈액 흐름의 중단을 결정 혈전 형성과 혈관 내피 세포막의 손상 구성 요소. 처음 1977 년 로젠 엘 – Sabban에 의해 제안 된이 방법은 나중에 쥐의 뇌에서 1985 년에 왓슨 향상과 현재 모델의 기초를 설정했습니다. 또한, 유전자 변형 마우스 라인의 증가 여부는 더 photothrombosis 모델에 대한 관심을 높이기 위해 기여했다. 간단히, 감광성 염료 (로즈 벵골) 복강 내 주입하고 혈류를 입력합니다. 차가운 광원에 의해 조명 될 때, 염료 활성화되고 지역의 결과, 혈소판 활성화 및 혈전증과 혈관 손상을 유발혈액의 흐름이 중단. 광원 재현하고 비 침습적 방법으로 관심의 대뇌 피질의 지역을 대상으로 할 수 있습니다 개두술의 필요없이 그대로 두개골에 적용 할 수 있습니다. 마우스는 다음 봉합하고 일어나 허용됩니다. 허혈성 손상의 평가는 신속 페닐-tetrazolium 염화물 또는 크레 실 바이올렛 염색을 수행 할 수 있습니다. 이 기술은 정확한 세포의 특성이나 기능 연구에 매우 유리하다 작은 크기와 잘 구분 된 경계의 경색을 생산하고 있습니다. 또한, 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.
Introduction
21 세기의 시작 부분에서, 허혈성 뇌졸중은 장기 장애 1 스트로크 2004 약 5.7 백만 명의 사망자를 차지하고있는 사망률 전세계의 두 번째 원인의 두 번째 원인을 나타내는 치명적인 질환이다. 에 배치 된 수많은 노력에도 불구하고, 뇌졸중 후 기능 회복을 개선 할 수있는 효과적인 치료는 아직 없습니다. 그들은 허혈성 손상의 병태 생리의 모델링을 허용하고 생체 내에서 서로 다른 신경 전략의 효능을 테스트 할 뇌졸중의 동물 모델은 널리 뇌졸중 연구 분야에 사용됩니다. 이러한 모델의 대부분은 다른 모델은 일반적으로 특정 영역, 모터 및 체성 감각 피질에 작은 크기의 병변을 연구하기 위해 개발 된 반면, 중간 대뇌 동맥 내 (일시적 또는 영구적) 혈액의 흐름을 방해하여 광범위한 경색을 유도하는 것을 목표로하고 있습니다. 그러나 여러 가지 요인 교류를 생성하기 위해 기여할 수사용하는 마우스 변형 등의 실험 뇌졸중 연구의 변화의 ertain 정도, 위의 모든 연령과 성별 연구에 포함 된 동물과, 기술은 허혈성 손상을 유도하기 위해 채택했다. 후자 점, 수술 기간 및 침입 (즉, 개두술에 대한 필요성)뿐만 아니라 안정적으로 허혈성 병변을 유발하는 운영자에게 필요한 수술 기술과 관련하여 매우 중요 결정 요소 성공과 생체 뇌졸중 연구에서 공정한 .
photothrombosis의 개념은 처음 1977 3 로젠 엘 – Sabban에 의해 제안 왓슨 등으로 쥐의 뇌에서의 응용 프로그램에 의해 유명하게되었습니다 1985 4 기술은 크게 향상 현재 모델 3의 기준을 설정되었던되었다. – 6. photothrombotic 방법은 이전에 혈액 계, 어에 전달 빛에 민감한 염료의 사진 활성화를 통해 대뇌 피질의 경색을 유도하는 것을 목표로무형 문화 유산은 빛에 노출 된 지역에있는 지방 혈관 혈전증의 결과. 순환 염료는 형광 근원하여 적절한 파장 조명되면 결과적으로 반응성이 매우 높은 중항 산소 제품의 많은 양의를 생성하는 산소 분자에 에너지를 해제합니다. 이러한 산소 중간체, 내피 세포막의 과산화를 유도 혈소판 부착 및 응집을 선도하고, 결국 지역의 대뇌 흐름은 중단 7을 결정하는 혈전의 형성.
Photothrombosis는 일반적으로 인간의 뇌졸중 발생하지만 빛에 노출 영역에 혈액 흐름을 선택적으로 차단 결과적으로 더 많은 표면 혈관에 병변을 유도로 하나 동맥 폐색이나 휴식하지 않는 비정규 허혈성 모델입니다. 이러한 이유로,이 방법은 대뇌 피질의 가소성의 세포 및 분자 연구에 적합 할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 실행의 단순성에 있습니다.를 제거하기 위하여 2 분, 두피를 면도하는 1 분; 정위 장치에 동물을 배치하는 3 ~ 5 분 또한, photothrombosis 쉽게 이십 분 대기 (마취 3 분을 포함한 동물 당 약 사십분에서 수행 할 수 소독액과 두피는 절개하고 두개골을 청소; 2 ~ 4 분 형광 섬유 배치, 장미 벵골 솔루션을 주입하는 1 분, 복강 내 확산 5 분 – 대기, 조명의 15 분, 5 분에 상처를 청소하고) 동물을 봉합. 또한, 어떤 수술 전문 지식 병변이 그대로 두개골의 간단한 조명을 통해 유도되는이 기술을 수행 할 필요가 없습니다. 고전적인 동맥 폐색과는 달리,이 메소드는 조사 영역 내 pial과 intraparenchymal 미세 혈관을 선택적으로 폐색을 결정하고 어떤 담보 용기가 대상 영역에 산소를 공급하는 남아 있지되는 병변 중 변동성을 줄일 수 있습니다.
그 특정 자연에도 불구하고photothrombotic 손상의 주가는 필수 메커니즘은 뇌의 뇌졸중 발생. 마찬가지로 인간의 뇌졸중 동맥 폐색, 혈소판 응집 및 혈전 형성 조사 면적 7 혈액 흐름의 중단을 결정합니다. 마찬가지로,이 모델은 중간 대뇌 동맥 폐색 8에서와 같이 중요한 염증 반응을 공유합니다. 그러나, 잘 delimitated 경계 부분적으로 보존 신진 대사의 영역에 해당하는 penumbral 영역, photothrombotic 병변 후 매우 감소 또는 inexistent입니다. 이 명확한 경계선은 허혈성 또는 그대로 대뇌 피질의 영역 내에서 세포 반응의 연구를 촉진 할 수있다. Photothrombosis 마우스 모델은 형질 전환 동물의 다양한 행정 연구에 특히 적합합니다. 실제로 고전적인 모델은 마우스 변형 바이어스 9 일으킬 수있는 높은 사망률 비율을보고 C57BL / 6의 모든 긴장과 오랜 기간 연구에 맞지 않을 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
수정 및 대체
때문에 562 nm에서의 흡수 피크, 필터링 된 크세논 아크 램프에서 녹색 빛 레이저는 원래 감광성 로즈 벵골 조사하기 위해 선택되었다. 레이저 매개 여기가 여전히 recently5를 사용했지만, 그것은 또한 염료 여기 10,15을 보장하는 형광 램프로 교체 할 수 있습니다. 형광 광섬유 레이저 소스보다 조작하기 쉽고 저렴합니다. 그러나 레이저는 일반적으로 선박 별 …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 통찰력있는 제안과 의견, 그리고 마우리 Grassano, 마리나 Boido 및 촬영 Ermira Pajaj에 대한 Annalisa 익살 감사합니다. 이 작품은 FP7-MC-214003-2 (마리 퀴리 초기 교육 네트워크 AXREGEN)와 COMPAGNIA 디 산 파올로, gliarep 프로젝트에 의해 투자되었다.
Materials
| MATERIAL NAME | COMPANY | CATALOGUE NUMBER | |
| Solutions and chemicals | |||
| Rose Bengal | Sigma, Italy | 330000 | |
| Isoflurane Vet | Merial | 103120022 | |
| Betadine | Asta Medica | ||
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| Surgical material and equipment | |||
| Fluosorber Filter | Havard apparatus | 340415 | |
| 150W fiber optic illuminator | Photonic | PL3000 | |
| Temperature Controller for Plate TCAT-2DF | Havard apparatus | 727561 | |
| Stereotaxic Instrument | Stoelting | 51950 | |
| Operating microscope | Takagi | OM8 | |
| Heating pad | |||
| Oxygen and nitrogen gas | |||
| Surgery Tools | World precision instrument | Optic fiber taps and mask are custom-made |
Referências
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