5/6th Nephrektomie in Kombination mit hohen Salz-Diät-und Stickstoffmonoxid-Synthase-Hemmung zu Chronic Kidney Disease in der Lewis-Ratte induzieren
Summary
Ein zweistufiges Verfahren zur chronischen Niereninsuffizienz (CNI) in der Lewis-Ratte etablieren durch chirurgisches Entfernen 5/6th der renalen Masse beschrieben. Kombination des chirurgischen Eingriffs, führt NOS-Hemmung und ein High-Salz-Diät zu einem Modell ähnlich menschlichen CKD, sodass Studie von kausalen Mechanismen und Entwicklung neuartiger therapeutischer Interventionen.
Abstract
Chronische Nierenerkrankungen (CKD) ist ein globales Problem. Verlangsamen CKD Progression ist ein großes gesundheitliches Priorität. Seit CKD durch komplexe Störungen der Homöostase gekennzeichnet ist, sind integrative Tiermodellen notwendig, um die Entwicklung und das Fortschreiten von CKD studieren. Um die Entwicklung der CKD und neuartige therapeutische Interventionen in CKD studieren, benutzen wir die 5/6th Nephrektomie Ablation Modell, einem bekannten experimentellen Modell der progressive Nierenerkrankung, ähnlich mehrere Aspekte der menschlichen CKD. Die Brutto-Reduktion renaler Masse verursacht progressive glomeruläre und Tubulointerstitielle Verletzung, Verlust der Überrest Nephronen und Entwicklung von systemischen und glomerulären Hypertonie. Es ist auch mit progressiver Verlust intrarenal Kapillare, Entzündungen und Glomerulosklerose verbunden. Risikofaktoren für CKD unweigerlich Auswirkungen auf die Endothelfunktion. Um dies zu imitieren, kombinieren wir Entfernung von 5/6th der renalen Masse mit Stickstoffmonoxid (NO) Verarmung und eine hohe Salz-Diät. Nach der Ankunft und Eingewöhnung, wieder Tiereceive eine NO-Synthase-Inhibitor (NG-Nitro-L-Arginin) (L-NNA) ergänzt, um Trinkwasser (20 mg / L) für einen Zeitraum von 4 Wochen, gefolgt von rechtsseitigen uninephrectomy gefolgt. Eine Woche später wird eine Zwischensumme Nephrektomie (SNX) auf der linken Seite durchgeführt. Nach SNX werden Tiere erlaubt, für zwei Tage nach LNNA im Trinkwasser (20 mg / L) folgte für einen weiteren Zeitraum von 4 Wochen zu erholen. Eine hohe Salz-Diät (6%), in Boden chow (siehe Zeitleiste Abbildung 1) ergänzt wird während des Experiments fortgesetzt. Progression der Niereninsuffizienz im Laufe der Zeit durch Messen Plasma Harnstoff, systolischer Blutdruck und Proteinurie gefolgt. Nach sechs Wochen nach SNX hat Nierenversagen entwickelt. Die Nierenfunktion wird mittels "Goldstandard" Inulin und para-Amino Hippursäure (PAH)-Clearance-Technologie. Dieses Modell der CKD wird durch eine Verringerung der glomerulären Filtrationsrate (GFR) und des effektiven renalen Plasma-Flow (ERPF), Hypertonie (systolischer Blutdruck> 150 mmHg), Proteinurie (> 50 mg/24 h gekennzeichnet) Und milden Urämie (> 10 mm). Histologische Merkmale sind Tubulointerstitielle Schäden, die durch Entzündung, Fibrose und tubuläre Atrophie und fokale Glomerulosklerose führt zu massiven Abbau von gesunden Glomeruli innerhalb der Restbevölkerung (<10%) wider. Follow-up bis 12 Wochen nach SNX weiteres Fortschreiten der CKD zeigt.
Introduction
Aufgrund seiner progressiven Charakter, anschließenden Endstadium Nierenerkrankung und assoziierten kardiovaskulären Morbidität und Mortalität ist CKD ein wachsendes Problem der öffentlichen Gesundheit ein. Verlangsamen CKD Progression ist daher ein großes gesundheitliches Priorität. Seit CKD durch komplexe Störungen der Homöostase gekennzeichnet ist, sind integrative Tiermodellen notwendig, um die Entwicklung und das Fortschreiten von CKD studieren. Die Niere besteht aus einer Vielzahl von verschiedenen Zelltypen, die miteinander interagieren. Diese Komplexität kann nicht in vitro nachgeahmt werden.
Um neue therapeutische Interventionen in CKD studieren, benutzen wir die 5/6th Nephrektomie Ablation Modell, ein bekannter experimentellen Modell der progressive Nierenerkrankung, ähnlich mehrere Aspekte der menschlichen CKD 2,3. Die Brutto-Reduktion renaler Masse verursacht progressive glomeruläre und Tubulointerstitielle Verletzung, Verlust der Überrest Nephronen und Entwicklung von systemischen und glomerulären Hypertonie. Es ist mit progr verbundenEssiv intrarenal Kapillare Verlust 4, Entzündung und Glomerulosklerose. Risikofaktoren für CKD unweigerlich Auswirkungen auf die Endothelfunktion 5. Wir verwendeten einen Rattenstamm (Lewis), die relativ beständig um die Entwicklung von CKD ist und deshalb haben wir kombiniert Entfernung von 5/6th der renalen Masse mit Stickstoffmonoxid (NO) Verarmung 6, 7, 8 und eine hohe Salz-Diät 9. Nach der Ankunft und Eingewöhnung, erhalten Tiere eine NO-Synthase-Inhibitor (L-NNA) ergänzt werden, um Trinkwasser (20 mg / L) für einen Zeitraum von 4 Wochen, gefolgt von rechtsseitigen uninephrectomy (UNX) mit Fortsetzung der L-NNA nach zwei Tagen gefolgt . Eine Woche später wird Zwischensumme Nephrektomie (SNX) dh Entfernung 2/3rds renalen Masse auf der linken Seite durchgeführt. Nach SNX werden Tiere erlaubt, für 2 Tage wieder gefolgt von 20 mg / L LNNA in Trinkwasser für einen Zeitraum von 4 Wochen zu erholen. Eine hohe Salz-Diät (6%), in Boden chow (siehe Zeitleiste Abbildung 1) ergänzt wird während des Experiments fortgesetzt. Ter Grund, die UNX auf der rechten Seite durchzuführen und SNX auf der linken Seite ist, dass die Nierengefäße mehr auf der linken Seite, die es einfacher, den Nieren ohne Dehnung der Gefäße zu viel, wenn die Niere außerhalb des Körpers ausgesetzt ist, Zugriff sind . In der Literatur werden Modelle beschrieben, bei dem die Pole des ersten linken Niere entfernt werden, gefolgt von UNX der rechten Niere eine Woche später 10,11,12. In unseren Händen Dieses Modell zeigte eine viel schnellere Entwicklung von Nierenversagen, sondern auch eine viel größere Variation in Verlust der Nierenfunktion. Progression der Niereninsuffizienz im Laufe der Zeit durch Messen Plasma Harnstoff, systolischer Blutdruck und Proteinurie gefolgt. Nach sechs Wochen nach SNX hat Nierenversagen entwickelt, gekennzeichnet durch deutliche Verringerung der glomerulären Filtrationsrate (69%) und des effektiven renalen Plasmaflusses (62%) 13 Hypertonie (systolischer Blutdruck> 150 mmHg), Proteinurie (> 50 mg/24 h) und milden Urämie (> 10 mm). Histologische Merkmale sind Tubulo-interstitielle Schäden, die durch Entzündung, Fibrose und tubuläre Atrophie und fokale Glomerulosklerose führt zu massiven Abbau von gesunden Glomeruli innerhalb der Restbevölkerung (<10%) wider. Follow-up bis 12 Wochen nach SNX zeigt ein weiteres Fortschreiten der CKD und bietet ein Fenster der Gelegenheit für die Bewertung der therapeutischen Interventionen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Chirurgische Entfernung von 5/6th der renalen Masse in der Lewis-Ratte, mit einem High-Salz-Diät und temporäre NOS Inhibition kombiniert führt zu einem Modell von CKD, die menschliche CKD ähnelt und ermöglicht Untersuchung der kausalen Mechanismen und Wirksamkeit von therapeutischen Interventionen in CKD.
Die 5/6th Nephrektomie Modell ist ein bekannter und vielfach beschrieben Modell für CKD. Allerdings ist das einfache Entfernen 5/6th der renalen Masse nicht sofort Nierenversagen in a…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken Krista den Ouden für ihre ausgezeichnete technische Unterstützung. Diese Technik wurde von der niederländischen Kidney Foundation, Grant C06.2174 unterstützt. MCV wird von der niederländischen Organisation für wissenschaftliche Forschung (NWO) Vidi-grant 016.096.359 unterstützt.
Materials
| Reagent | |||
| L-NNA | Sigma-aldrich | N5501 | |
| Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm | Johnson&Johnson | Ms0005 | |
| Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 | Ethicon | V303H | |
| Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 | Ethicon | V392H | |
| Buprenorphine (0.3 mg/ml) | Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals | unknown | |
| Equipment | |||
| Student Tissue Forceps – 1×2 Teeth 12 cm | Fine Science Tools (FST) | 91121-12 | |
| Student Standard Pattern Forceps | FST | 91100-12 | |
| Mayo Scissors | FST | 14010-15 | |
| 2X Semken Forceps | FST | 11008-13 | |
| Student Iris Scissors | FST | 91460-11 | |
| Olsen-Hegar Needle Holder | FST | 12002-14 |
Referências
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