एक<em> Caenorhabditis एलिगेंस</emAmylopathy अध्ययन के लिए> मॉडल प्रणाली
Summary
हम कृमि में amylopathies के पहलुओं का अध्ययन करने के तरीकों का वर्णन<em> सी. एलिगेंस</em>. हम मानव Aβ व्यक्त कीड़े के निर्माण के लिए कैसे दिखा<sub> 42</sub> न्यूरॉन्स में और कैसे व्यवहार assays में उनके कार्य का परीक्षण करने के लिए. हम आगे औषधीय परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि प्राथमिक neuronal संस्कृतियों प्राप्त करने के लिए कैसे दिखा.
Abstract
Amylopathy समय के साथ ऊतकों में amyloid बीटा के असामान्य संश्लेषण और संचय (Aβ) का वर्णन है कि एक शब्द है. Aβ अल्जाइमर रोग (ई.) की एक बानगी है और Lewy शरीर मनोभ्रंश, समावेशन शारीरिक Myositis और मस्तिष्क amyloid वाहिकारुग्णता 1-4 में पाया जाता है. Amylopathies उत्तरोत्तर समय के साथ विकसित करना. इस कारण से कम lifespans के साथ साधारण जीवों इन शर्तों की आणविक पहलुओं को स्पष्ट करने में मदद कर सकते हैं. यहाँ, हम कीड़ा Caenorhabditis एलिगेंस का उपयोग कर Aβ की मध्यस्थता neurodegeneration के अध्ययन करने के लिए प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल का वर्णन है. इस प्रकार, हम वयस्क hermaphrodites की syncytial जननग्रन्थि में डीएनए एन्कोडिंग मानव Aβ 42 इंजेक्शन द्वारा ट्रांसजेनिक कीड़े का निर्माण. Transformant लाइनों एक mutagenesis के प्रेरित एकीकरण द्वारा स्थिर रहे हैं. कृमि उनके अंडे इकट्ठा करने और बोने से सिंक्रनाइज़ उम्र के हैं. Aβ 42 व्यक्त न्यूरॉन्स के समारोह (उपयुक्त व्यवहार assays में परीक्षण किया है कीमोटैक्सिस परखएस). भ्रूण से प्राप्त प्राथमिक neuronal संस्कृतियों व्यवहार डेटा के पूरक हैं और विरोधी apoptotic यौगिकों के neuroprotective प्रभाव का परीक्षण करने के लिए उपयोग किया जाता है.
Introduction
Amyloid बीटा (Aβ) β और γ secretases 1 से amyloid प्रोटीन अग्रदूत (एपीपी) के अनुक्रमिक दरार के बाद बनाई है कि 36-43 अमीनो एसिड की एक पेप्टाइड है. γ secretase Aβ पेप्टाइड सी टर्मिनल अंत प्रक्रियाओं और अपने चर लंबाई 5 के लिए जिम्मेदार है. Aβ का सबसे सामान्य रूप Aβ 40 और Aβ 42, और अधिक सामान्यतः इस तरह के विज्ञापन के रूप में 5 वैकृत शर्तों के जुड़े होने के बाद के हैं. उच्च सांद्रता Aβ फार्म β पत्र पर कि amyloid तंतु 6 के लिए फार्म का कुल. तंतु जमा न्यूरॉन्स आसपास बूढ़ा सजीले टुकड़े का मुख्य घटक हैं. सजीले टुकड़े और प्रसारण, गैर पट्टिका Aβ oligomers, दोनों Aβ के अंतर्निहित रोगजनक रूपों का गठन करने के लिए लगा रहे हैं.
न्यूरोनल amylopathies की प्रयोगशाला अध्ययन के समय के साथ कि इन शर्तों के प्रगति तथ्य से जटिल है. इसलिए, यह importan हैचूहों के साथ छोटे जीवन काल के लिए मॉडल पूरक आनुवंशिक विनयशील पशु विकसित करने के लिए टी. इन मॉडलों amylopathies-आमतौर सेलुलर और आणविक और उनकी सादगी के आधार पर, समस्या का सार पर कब्जा करने के लिए मदद के विशिष्ट पहलुओं को स्पष्ट करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. कीड़ा Caenorhabditis एलिगेंस गिरता इस श्रेणी है. यह एक छोटे जीवन काल है, ~ 20 दिन और जीन अभिव्यक्ति, प्रोटीन की तस्करी, neuronal संपर्क, synaptogenesis, सेल संकेतन, और मौत के नियमन सहित इसके अलावा बुनियादी सेलुलर प्रक्रियाओं में स्तनधारी 7 के समान हैं. कीड़ा के अद्वितीय सुविधाओं शक्तिशाली आनुवंशिकी और स्वतंत्र रूप से संवहनी नुकसान की neuronal नुकसान का अध्ययन करने के लिए सक्षम बनाता है जो एक पोत प्रणाली की कमी शामिल है. दूसरी ओर, एक मस्तिष्क की कमी सी के उपयोग की सीमा neurodegeneration के कई पहलुओं का अध्ययन करने के लिए एलिगेंस. इसके अलावा, घावों की संरचनात्मक वितरण के प्रजनन और पहचान इस जीव में नहीं किया जा सकता. अन्य सीमाations जीन की अभिव्यक्ति प्रोफाइल और जटिल व्यवहार और स्मृति समारोह की हानि दोनों में मतभेद का आकलन करने में कठिनाई शामिल हैं. यहाँ हम सी. उत्पन्न करने के तरीकों का वर्णन amylopathies की एलिगेंस मॉडल.
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ हम सी. का उपयोग amylopathies के सेलुलर और आणविक पहलुओं का अध्ययन करने के लिए एक संयुक्त दृष्टिकोण का वर्णन एलिगेंस. इस दृष्टिकोण के लाभ में शामिल हैं: 1.) कम लागत C.elegans कमरे के तापमान पर, जीवाणु के साथ ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalog Number | Comments |
| 1. NGM | |||
| Sodium Chloride | Sigma-Aldrich | S5886 | 3 g |
| Bacteriological agar | AMRESCO | J637 | 17 g |
| Bacto-peptone | AMRESCO | J636 | 2.5 g |
| Distilled Water | Bring to 975 ml | ||
| Sterilized by autoclaving, then add the following items and mix well | |||
| Magnesium sulfate | Sigma-Aldrich | M2643 | 1 ml of 1 M stock |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C5670 | 1 ml of 1 M stock |
| Cholesterol | Sigma-Aldrich | C3045 | 1 ml of 5 mg/ml stock( in ethanol) |
| Potassium phosphate buffer | 25 ml of 1M stock | ||
| 2. Potassium phosphate buffer | |||
| Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P5655 | 108.3 g |
| Potassium phosphate dibasic | Sigma-Aldrich | P3786 | 35.6 g |
| Distilled Water | Bring to 1 L | ||
| Sterilized by autoclaving | |||
| 3. M9 buffer | |||
| Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P5655 | 3 g |
| Sodium phosphate dibasic | Sigma-Aldrich | S5136 | 6 g |
| Sodium Chloride | Sigma-Aldrich | S5886 | 5 g |
| Magnesium sulfate | Sigma-Aldrich | M2643 | 1 ml of 1 M stock |
| Distilled Water | Bring to 1 L | ||
| Sterilized by autoclaving | |||
| 4. Egg buffer (pH 7.3, 340 mOsm) | |||
| Sodium Chloride | Sigma-Aldrich | S5886 | 118 mM |
| Potassium Chloride | Sigma-Aldrich | P5405 | 48 mM |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C5670 | 2 mM |
| Magnesium Chloride | Sigma-Aldrich | M4880 | 2 mM |
| HEPES | Fisher Scientific | BP310 | 25 mM |
| Distilled Water | Bring to 1 L | ||
| Sterilized by autoclaving | |||
| 5. CM-15 | |||
| L-15 culture medium | Gibco | 11415 | 450 ml |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 10437-028 | 50 ml |
| Penicillin | Gibco | 15140 | 50 units/ml |
| Streptomycin | Gibco | 15140 | 50 g/ml |
| Adjust to 340 mOsm with sucrose then sterile filter into autoclaved bottles and store at 4 °C | |||
| 6. Other Reagents | |||
| Halocarbon 700 oil | Halocarbon Products | 9002-83-9 | |
| 5 μm Acrodisc Syringe Filter | PALL Co. | 4199 | |
| Chitinase | Sigma-Aldrich | C6137-5UN | |
| Lectin (peanut) | Sigma-Aldrich | L0881-10MG | |
| Sodium hydroxide | Fisher Scientific | S320 | |
| Lysine | Sigma-Aldrich | L5501 | |
| Biotin | Sigma-Aldrich | B4639 | |
| Sodium hypochlorite solution | Sigma-Aldrich | 425044 | |
| Sodium azide | Sigma-Aldrich | 71289 | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | S0389 |
Referências
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