इलैक्ट्रोफिजियोलॉजी और उच्च संकल्प दो photon माइक्रोस्कोपी के लिए माउस Vestibular संवेदी उपकला की एक पृथक अर्द्ध बरकरार तैयारी
Summary
Vestibular में बाल सेल समारोह का विश्लेषण खोपड़ी, पथराया हुआ टेम्पोरल हड्डी का सबसे मुश्किल हिस्सा भीतर गहरे अपने स्थान से जटिल है. हाल कार्यात्मक बाल सेल पढ़ाई तीव्रता से पृथक बालों की कोशिकाओं का इस्तेमाल किया है. यहाँ हम electrophysiological और दो photon माइक्रोस्कोपी अध्ययन के लिए माउस को vestibular उपकला की एक अर्द्ध बरकरार तैयारी का वर्णन है.
Abstract
समझना vestibular बालों की कोशिकाओं के सामान्य परिस्थितियों में कार्य करते हैं, या कैसे आघात, बीमारी, और इस कार्य को बाधित बुढ़ापे में preventative दृष्टिकोण और / या उपन्यास चिकित्सकीय रणनीति के विकास में एक महत्वपूर्ण कदम है. हालांकि, असामान्य vestibular समारोह को देख अध्ययन के बहुमत सेलुलर स्तर पर किया गया है लेकिन मुख्य रूप से इस तरह की चाल का विश्लेषण करती है और vestibulo नेत्र पलटा प्रदर्शन के रूप में vestibular में शिथिलता के व्यवहार assays पर ध्यान केंद्रित नहीं है. यह काम कोई बात बिगड़ जाए जब क्या होता है के बारे में महत्वपूर्ण डेटा प्राप्त हुए है, वहीं कम जानकारी रोग के मूल कारणों के बारे में gleaned है. Vestibular समारोह आबाद कि सेलुलर और subcellular प्रक्रियाओं पर ध्यान दिया है कि पढ़ाई की, ज्यादातर ने अपने synaptic कनेक्शन और समर्थन सेल वातावरण से रहित तीव्रता से अलग बालों की कोशिकाओं, पर भरोसा किया है. इसलिए, एक प्रमुख तकनीकी चुनौती प्रस्तुत करने में exquisitely संवेदनशील vestibular बालों की कोशिकाओं के लिए उपयोग किया गया हैaration कम physiologically, बाधित है कि. यहाँ हम बाल सेल / प्राथमिक अभिवाही परिसरों सहित स्थानीय सूक्ष्म वातावरण को बरकरार रखे हुए है कि माउस vestibular संवेदी उपकला की एक अर्द्ध बरकरार तैयारी प्रदर्शित करता है.
Introduction
हमारे रोजमर्रा के जीवन को vestibular प्रणाली का महत्वपूर्ण योगदान के बावजूद, उम्र के साथ vestibular समारोह में मनाया गिरावट के लिए जिम्मेदार प्रक्रियाओं का एक स्पष्ट समझ मायावी रहते हैं. ज्ञान की इस कमी का एक कारण vestibular समारोह में गिरावट है कि लगभग विशेष vestibulo नेत्र पलटा (VOR), बाह्य vestibular समारोह का एक सटीक सूचक सहित व्यवहार assays, का उपयोग कर पता लगाया गया है, लेकिन आंतरिक घटकों के परिवर्तन में सीमित अंतर्दृष्टि प्रदान करता है . यह स्वास्थ्य, बीमारी, या बुढ़ापे में vestibular बाल सेल समारोह के बारे में हमारी समझ के लिए एक प्रमुख बाधा है.
व्यक्तिगत vestibular बालों की कोशिकाओं के कई अध्ययन किए गए हैं, वहीं एक बड़ी कमी बालों की कोशिकाओं और भी calyx अभिवाही टर्मिनलों यांत्रिक और / या एंजाइमी उपचार के माध्यम से अपने सामान्य वातावरण से हटा रहे हैं जहां तीव्र बाल सेल की तैयारी, पर निर्भरता की गई है. इस तरह के दृष्टिकोण inevitably बाल सेल और calyx, और बाल सेल और समर्थन सेल के बीच नाजुक माइक्रोआर्किटेक्चर बाधित. अर्द्ध बरकरार तैयारी 1-5, और एक अलग माउस भूलभुलैया तैयारी 6 के विकास के साथ, और अधिक बारीकी से vivo में उन जैसे लगते हैं कि शर्तों के तहत अन्तर्ग्रथनी संचार के विभिन्न रूपों का अध्ययन करने का अवसर अब भी है. दरअसल, लिम एट अल. (2011) मैं vestibular बालों की कोशिकाओं neuroepithelium भीतर एम्बेडेड बनी है कि उन लोगों की तुलना में तीव्रता से अलग प्रकार से दर्ज पूरे सेल धाराओं में चिह्नित अंतर दिखाया. विशेष रूप से, पोटेशियम बाल सेल और अभिवाही calyx बीच, कहनेवाला अंतरिक्ष में जमा करने के लिए माना जाता है, और काफी बाल सेल प्रतिक्रिया 7 में परिवर्तन. इस प्रकार की जानकारी यहां वर्णित vestibular संवेदी उपकला की अर्द्ध बरकरार तैयारी के बिना प्राप्त करने के लिए असंभव हो जाएगा. हम माउस शिखा 3 की अर्द्ध बरकरार तैयारी का प्रदर्शन, और पूरे सेल पैच इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी से प्राप्त प्रतिनिधि परिणाम है, और दो photon कैल्शियम इमेजिंग दिखा.
Protocol
Representative Results
Discussion
संतुलन की हमारी भावना अंतर्निहित तंत्र अन्य संवेदी प्रणाली के साथ तुलना में सीमित ध्यान प्राप्त हुआ है, दृश्य और श्रवण सिस्टम उदा. कर्ण कोटर या संतुलन समारोह में परिवर्तन की जांच की है कि पढ़ाई की, ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस कार्य के लिए अनुदान आर लिम और ए जे शिविर के लिए एक गार्नेट सर्व और रॉडने विलियम्स मेमोरियल फाउंडेशन परियोजना अनुदान द्वारा प्रदान किया गया.
Materials
| REAGENTS | |||
| Leibovitz medium L-15 | Sigma Aldrich | L4386-10X1L | |
| BAPTA-1-oregon green | Invitrogen | O6806 | |
| EQUIPMENT | |||
| Stereo microscope | Leica Microsystems | A60S | |
| Upright microscope | Olympus | BX51WI | |
| Two-photon microscope | Olympus/La Vision | BX51WI/ TriMScope II | |
| Dumont #5 SF Forceps | FST | 11252-00 | |
| Friedman-Pearson Rongeurs | FST | 16221-14 | |
| Standard Pattern Scissors | FST | 14001-12 | |
| InstraTECH A-D converter | HEKA | ITC-18 | |
| Sutter Micromanipulator | Sutter | MP-225/M | |
| multiclamp amplifier | Axon Instruments | 700B | |
| Data acquisition software (electrophysiology) | Axograph | N/A | |
| Imspector Data acquisition software (two-photon) | Max Planck innovation | N/A |
Referências
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