परिधीय स्टेम सेल प्रवास के विश्लेषण के लिए माउस cremaster मांसपेशियों में microcirculation के intravital माइक्रोस्कोपी
Summary
माउस एम. cremaster microcirculation के intravital माइक्रोस्कोपी एक अद्वितीय और परिधीय अस्थि मज्जा स्टेम सेल प्रवास के विश्लेषण के लिए vivo मॉडल में अच्छी तरह से मानकीकृत प्रदान करता है.
Abstract
पुनर्योजी सेल थेरेपी के संदर्भ में intravascular सेल आवेदन प्रोटोकॉल के युग में, ऊतक nonmarrow के लिए स्टेम सेल प्रवास के अंतर्निहित तंत्र पूरी तरह से स्पष्ट नहीं किया गया है. हम यहाँ विवो में परिधीय अस्थि मज्जा स्टेम सेल प्रवास के विश्लेषण के लिए माउस cremaster microcirculation के लिए आवेदन किया intravital माइक्रोस्कोपी की तकनीक का वर्णन. एम. cremaster की intravital माइक्रोस्कोपी पहले संवहनी endothelium साथ श्वेतकोशिका बातचीत का प्रत्यक्ष अवलोकन के लिए भड़काऊ अनुसंधान के क्षेत्र में शुरू किया गया है. पर्याप्त परिधीय स्टेम और पूर्वपुस्र्ष सेल प्रवास यह अन्तःचूचुक साथ intravasculary प्रशासित स्टेम कोशिकाओं की बातचीत का अवलोकन और मात्रा का ठहराव के लिए एम. cremaster मॉडल को लागू करने के लिए बोधगम्य है अस्तर endothelial पर साथ और फर्म आसंजन रोलिंग के समान प्रारंभिक चरणों में शामिल है. विभिन्न रासायनिक घटकों चुनिंदा लक्ष्य टी के लिए लागू किया जा सकता हैसरल superfusion तकनीक द्वारा मुद्दा, यह अस्थि मज्जा के बाहर एक जीवित जीव में जगह लेने के लिए प्रारंभिक स्टेम सेल भर्ती के लिए आवश्यक microenvironmental पूर्व शर्त की स्थापना संभव है.
Introduction
वर्तमान अनुच्छेद के प्रयोजन के परिधीय अस्थि मज्जा स्टेम सेल प्रवास का प्रत्यक्ष अवलोकन और विश्लेषण के लिए माउस cremaster microcirculation पर लागू intravital माइक्रोस्कोपी की तकनीक (IVM) का वर्णन है.
स्टेम सेल की मौजूदा अवधारणा के आधार ऊतक और अंग उत्थान घायल ऊतक 1 के लिए अस्थि मज्जा व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं के घर वापस आना शामिल है. सफल स्टेम सेल प्रवास के लिए एक महत्वपूर्ण कदम transendothelial प्रवास और अंततः अंग engraftment 2 द्वारा पीछा घायल अंग के भीतर स्थानीय अन्तःचूचुक साथ सेल बातचीत स्टेम शामिल हैं. इन स्टेम सेल के intravital विश्लेषण – endothelial सेल बातचीत vivo में अलग pathophysiological सेटिंग्स में एक स्टेम सेल आधारित पुनर्योजी प्रतिक्रिया की मात्रा का ठहराव के लिए एक आदर्श पैरामीटर रूपों. इसके अलावा, यह बोधगम्य है कि लगता है, भविष्य में, विशेष स्टेम सेल पी के प्रवासी क्षमता के intravital विश्लेषणमानकीकृत microcirculatory वातावरण के भीतर opulations, पूर्व आगे नैदानिक परीक्षण करने के लिए इन आबादियों को आगे बढ़ाने के लिए लागू किया जा सकता है.
Intravital माइक्रोस्कोपी शुरू में भड़काऊ अनुसंधान 3 के क्षेत्र में vivo में ल्युकोसैट endothelial सेल बातचीत का अवलोकन और मात्रा का ठहराव के लिए विकसित किया गया है. Intravital माइक्रोस्कोपी पढ़ाई के पहले सफल रिकॉर्डिंग एक प्रकाश माइक्रोस्कोप 4 के तहत 'मेंढक जीभ और mesenteries का अध्ययन, 19 वीं सदी में पहले से ही Cohnheim द्वारा सूचित किया गया. इसके पहले प्रयोग IVM एक जबरदस्त तकनीकी विकास और आज आया है के बाद से कुछ आवश्यक घटक मात्रात्मक IVM प्रदर्शन करने के क्रम में आवश्यक शर्तें फार्म: (i) ऊतक ऑप्टिकल उपयोग की अनुमति है कि तैयारी, (द्वितीय) एक माइक्रोस्कोप से पता लगाया जा सकता है कि आणविक जांच, (iii ) एक प्रणाली का पता लगाने और छवि डेटा से ब्याज के मापदंडों निकाल सकते हैं कि (चतुर्थ) कंप्यूटर आधारित विश्लेषण प्रणाली से जुड़ा एक माइक्रोस्कोप4 सेट.
ऊतक तैयारी की एक किस्म mesenteries और माउस और चूहा 5, माउस 6 और हैम्स्टर, खरगोश कान और कुछ नाम हैं हम्सटर गाल थैली के पृष्ठीय skinfold कक्षों का जिगर सहित IVM के अध्ययन के लिए पेश किया गया है.
हालांकि, तैयारी और दृश्य एक अच्छी तरह से मानकीकृत शल्य प्रक्रिया द्वारा संभव के रूप में निम्नलिखित में हम, intravital टिप्पणियों के लिए एक आदर्श ऊतक का प्रतिनिधित्व माउस cremaster मांसपेशियों, पर ध्यान दिया जाएगा, और सामान्य में आंदोलन कलाकृतियों की कोई समस्या नहीं होती. खुला cremaster मांसपेशियों तैयारी Baez द्वारा 1970 के दशक में पहली बार के लिए बाहर ले गए और उनके सहयोगियों ने 7 था. मूल रूप से चूहों के लिए वर्णित है, यह माउस से 8 भी सफलतापूर्वक अपनाया गया है. पिछले अध्ययनों मुख्य रूप से पोत दीवार के साथ श्वेतकोशिका बातचीत पर ध्यान केंद्रित किया था के बाद, अपने स्वयं के समूह ने हाल ही में एक valua के रूप में माउस cremaster मांसपेशियों तैयारी शुरू कीप्रत्यक्ष दृश्य और एक परिभाषित microenvironment 9 के भीतर स्टेम सेल अन्तःचूचुक बातचीत की मात्रात्मक विश्लेषण के लिए ble उपकरण. विभिन्न स्टेम सेल subpopulations murine सी किट + अस्थि मज्जा स्टेम सेल और mesenchymal स्टेम सेल, साथ ही मानव सीडी 133 + अस्थि मज्जा स्टेम सेल 10-12 सहित, इस मॉडल के उपयोग का अध्ययन किया गया है. दाता अस्थि मज्जा और दृश्य के लिए फ्लोरोसेंट लेबलिंग से सेल अलगाव के बाद, स्टेम सेल चुनिंदा जिससे दूरदराज के अंगों के भीतर किसी भी सेल फंसाने से परहेज, ऊरु धमनी के माध्यम से एक धमनी इंजेक्शन के उपयोग cremaster microcirculation में लागू कर रहे हैं. संभवतः संबंधित सेटिंग्स में स्थानीय स्टेम सेल प्रवास मध्यस्थता विभिन्न chemokines, topically सरल superfusion तकनीक से लक्ष्य ऊतकों को लागू किया जा सकता है, क्योंकि इसके अलावा, cremaster मांसपेशियों मॉडल विशेष रूप से उपयोगी है.
Protocol
Representative Results
Discussion
Intravital प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी प्रत्यक्ष दृश्य और स्टेम सेल अन्तःचूचुक बातचीत की मात्रात्मक विश्लेषण के लिए अनुमति देता है. microsurgical जोखिम और तकनीक intravital दृश्य अच्छी तरह श्वेतकोशिका-अन्तःचूचुक बातची?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalog Number |
| Carboxy-fluorescein diacetate succinimidylester (CFDA) | Invitrogen, Carlsbad, CA, USA | C1157 |
| Rhodamine 6 G (1%) | Sigma-Aldrich, Munich, Germany | 83697 |
| Ketamin (Ketanest) | Pfizer, Berlin, Germany | not available |
| Xylacin (Rompun) | Bayer, Leverkusen, Germany | not available |
| Dulbecco's Phosphate – buffered saline (PBS) | PAN Biotech, Aidenbach, Germany | P04-36500 |
Referências
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