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Imunologia e Infecção

स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया के साथ इंट्रानासाल उपनिवेशीकरण के दौरान भड़काऊ प्रतिक्रियाओं का लक्षण वर्णन

Published: January 17, 2014
doi:
10.3791/50490
, , ,
1Department of Pathology and Molecule Medicine,McMaster University

Summary

स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया के साथ मुरीन नासोफेरिंक्स का उपनिवेशीकरण और अनुयायी या भर्ती कोशिकाओं के बाद की निकासी का वर्णन किया गया है। इस तकनीक में नासोफेरिनक्स को फ्लश करना और नरों के माध्यम से तरल पदार्थ का संग्रह करना शामिल है और विभिन्न रीडआउट के लिए अनुकूलनीय है, जिसमें अंतर कोशिका मात्राकरण और सीटू मेंएमआरएनए अभिव्यक्ति का विश्लेषण शामिल है।

Abstract

स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया द्वारा नासोफेरिंजियल उपनिवेशीकरण फेफड़ों या खून के बहाव पर आक्रमण करने के लिए एक शर्त है1। यह जीव नासोफेरिनक्स की म्यूकोसल सतह को उपनिवेश बनाने में सक्षम है, जहां यह मेजबान के अन्य ऊतकों पर आक्रमण करने के लिए मेजबान सुरक्षा को गुणा और अंततः दूर कर सकता है। सामान्य रूप से निचले श्वसन तंत्र में संक्रमण की स्थापना के परिणामस्वरूप निमोनिया होता है। वैकल्पिक रूप से, बैक्टीरिया रक्तधारा में फैल सकता है जिससे जीवाणु होता है, जो उच्च मृत्यु दर2से जुड़ा होता है, या फिर सीधे न्यूमोकोकल मेनिनजाइटिस के विकास के लिए नेतृत्व करता है। कीइनेटिक्स को समझना, और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के लिए, नासोफेरिंजियल उपनिवेशीकरण एस निमोनिया संक्रमण मॉडल का एक महत्वपूर्ण पहलू है।

इंट्रानासल उपनिवेशीकरण के हमारे माउस मॉडल को मानव मॉडल3 से अनुकूलित किया गया है और इसका उपयोग कई शोध समूहों द्वारा नासोफेरिंक्स4-7में मेजबान-रोगजनक प्रतिक्रियाओं के अध्ययन में किया गया है। मॉडल के पहले भाग में, हम एस निमोनिया के एक नैदानिक आइसोलित का उपयोग एक आत्म सीमित जीवाणु उपनिवेशीकरण है कि मानव वयस्कों में गाड़ी की घटनाओं के समान है स्थापित करने के लिए । यहां विस्तृत प्रक्रिया में एक जीवाणु इनोकुलम तैयार करना शामिल है, जिसके बाद प्रशासन के एक इंट्रानैसल मार्ग के माध्यम से इनोकुलम के वितरण के माध्यम से उपनिवेशीकरण घटना की स्थापना होती है। निवासी मैक्रोफेज स्थिर स्थिति के दौरान नासोफेरिंक्स में प्रमुख कोशिका प्रकार हैं। आमतौर पर, असंक्रमित चूहों8में कुछ लिम्फोसाइट्स मौजूद होते हैं, हालांकि म्यूकोसल उपनिवेशीकरण कम से उच्च ग्रेड सूजन (बैक्टीरियल प्रजातियों और तनाव की उग्रता के आधार पर) का कारण बनेगा जिसके परिणामस्वरूप प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और मेजबान प्रतिरक्षा कोशिकाओं की बाद की भर्ती होगी। इन कोशिकाओं को नाड़ों के माध्यम से श्वासनली सामग्री के एक लाव्ज द्वारा अलग किया जा सकता है, और संक्रमण के काइनेटिक्स को बेहतर ढंग से समझने के लिए उपनिवेशीकरण बैक्टीरिया के घनत्व से सहसंबद्ध किया जा सकता है।

Protocol

शुरू करने से पहले: सभी कदम बायोहैजार्ड स्तर 2 (बीएसएल 2) जैविक सुरक्षा कैबिनेट (बीएससी) में किए जाते हैं जब तक कि अन्यथा नहीं कहा जाता है। कृपया सुनिश्चित करें कि आपने प्रयोगों की शुरुआत से पहले संस्…

Representative Results

चित्रा 1 प्रोटोकॉल के मुख्य चरणों का सारांश एक अवलोकन योजनाबद्ध का प्रतिनिधित्व करता है। आंकड़े 2-3 यहां वर्णित प्रोटोकॉल के लिए निहित माइक्रोबायोलॉजिकल पद्धति का दृश्य प्रदान करते हैं। <s…

Discussion

इस अध्ययन में हमने स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया के नैदानिक आइसोल्यूजन तनाव और बैक्टीरिया के जवाब में नासोफेरिंक्स में भर्ती प्रतिरक्षा कोशिकाओं के बाद के अलगाव और लक्षण वर्णन का उपयोग करके चूहों के ?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

लेखक स्ट्रेप्टोकोकस निमोनियाके नैदानिक उपभेदों के उपहार के लिए पेंसिल्वेनिया विश्वविद्यालय के डॉ जेफरी वीसर का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । यह काम स्वास्थ्य अनुसंधान के लिए कनाडा के संस्थानों द्वारा वित्त पोषित किया गया था । सीवी एक एम जी DeGroote फैलोशिप और कनाडा के वक्ष सोसायटी से एक फैलोशिप द्वारा वित्त पोषित किया गया था । यह काम ओंटारियो फेफड़े एसोसिएशन और स्वास्थ्य अनुसंधान के कनाडा के संस्थानों (CIHR) द्वारा वित्त पोषित किया गया था । बॉडिश प्रयोगशाला में काम करने के हिस्से में उनका समर्थन किया जाता है माइकल जी डिग्रूट सेंटर फॉर संक्रामक रोग अनुसंधान और मैकमास्टर इम्यूनोलॉजी रिसर्च सेंटर।

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalog Number
Anti-Mouse Ly6C FITC BD Pharmingen 553104
Anti-Mouse Ly6G PE BD Pharmingen
Anti-Mouse CD45.1 eFluor 450 eBioscience 48-0453-82
Anti-Mouse F4/80 Antigen APC eBioscience 17-4801-82
Anti-Mouse CD11c PerCP-Cy5.5 eBioscience 45-0114-82
Anti-Mouse CD11b PE-Cy7 eBioscience 25-0112-82
Anti-Mouse CD3 Alexa Fluor 700 eBioscience 56-0032-82
Anti-Mouse CD4 eFluor 605NC eBioscience 93-0041-42
Intramedic Polyethylene Tubing – PE20 Becton Dickinson 427406
BD 1ml Syringe Becton Dickinson 309659
BD 26G3/8 Intradermal Bevel Becton Dickinson 305110
Buffer RLT Lysis Buffer Qiagen 79216
Difco Tryptic Soy Agar Becton Dickinson 236950
Defibrinated Sheep Blood PML Microbiologicals A0404
RNAqueous-Micro Kit Ambion AM1931
M-MuLV Reverse Transcriptase New England Biolabs M0253L
GoTaq qPCR Master Mix Promega A6001
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Citar este artigo
Puchta, A., Verschoor, C. P., Thurn, T., Bowdish, D. M. E. Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae. J. Vis. Exp. (83), e50490, doi:10.3791/50490 (2014).
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