Summary
Den stigende brug af zebrafisk som en dyremodel kræver udvikling af effektive metoder til levering af kendte mængder af forbindelser og opløsninger. Den sonde nedenfor beskrevne procedure giver mulighed for oral indgivelse af præcise mængder af opløsning pålideligt, sikkert og effektivt til voksen zebrafisk.
Abstract
Zebrafisken er blevet en vigtig in vivo-model med biomedicinsk forskning. Effektive metoder skal udvikles og udnyttes til at levere forbindelser eller midler i løsninger til videnskabelig forskning. Nuværende metoder til administration af forbindelser oralt til voksne zebrafisk er unøjagtige som følge af variabiliteten i frivilligt forbrug af fisk. En sonde procedure blev udviklet til at levere præcise mængder af smitstoffer til zebrafisk for at studere i biomedicinsk forskning. Voksen zebrafisk over 6 måneder blev bedøvet med 150 mg / L af pufret MS-222 og sondeernæret med 5 ml af opløsningen ved hjælp af fleksible kateter implantation rørene forbundet til et snit 22-G nål. Den fleksible slange blev nedsænket i mundhule zebrafisk indtil spidsen af slangen udvides forbi gællerne (ca. 1 cm). Opløsningen blev derefter injiceret langsomt ind i tarmkanalen. Denne metode var effektiv 88% af tiden, med fisk inddrive uneventfully. Detprocedure er også effektiv som én person kan mavesonde 20-30 fisk i en time. Denne metode kan bruges til præcist at administrere midler til infektionssygdomme undersøgelser eller undersøgelser af andre forbindelser i voksen zebrafisk.
Introduction
Nuværende metoder til administration af forbindelser oralt til zebrafisk omfatter administrerer forbindelser top-belagt på foder, blandet ind i gelatine kost 1, bioencapsulated ind artemia 2, blandet med lipidindkapslede diæter 3, voks spray perler 4 og via gluten-baserede kost. 5 Begrænsninger i disse metoder til oral administration omfatter høje udvaskning satser og ufuldstændige eller uforudsigelige sammensatte forbrug af fisk. Disse variabler er problematisk, fordi i infektionssygdomme undersøgelser, vel vidende den infektive dosis administreret til fiskene kan være kritisk for at studere succes. Desuden har tidligere arbejde vist, at visse forbindelser administreres i vandbade forårsage giftige læsion at zebrafisk gæller før tarm-effekter, der kan være under studiet forekomme. 6.
Sonde er en standard metode, der anvendes i andre art laboratoriedyr at administrere præcise mængder af et produkt med aknown koncentration for studier i biomedicinsk og farmaceutisk forskning. Først for nylig har metoder til gavaging zebrafisk blevet beskrevet i litteraturen. Én beskrevne teknik er en to-personers metoden i en 24-G kateterkappen knyttet til en 2-20 gl pipette til at levere 5 ul opløsning. 7 beskrevne metode havde en dødelighed på 8,7% og 39% på den første og anden forsøg, henholdsvis det meste af dødeligheden blev tilskrevet drægtige hunner. Den anden sonde beskrevne teknik brugt stump spids sonde sprøjter at administrere 5 ul løsning medakas (Oryzias latipes). 8. Oplysninger om dødeligheden blev ikke leveret, og den nøjagtige proces til at udføre sonde ikke var beskrevet. Ifølge den canadiske Rådet om Animal Care og Laboratory Zebrafish, op til 1% af fiskens kropsvægt kan administreres via sonde. 9,10 Vores mål var at udvikle en gentagelig, sikker og effektiv metode til at levere præcise mængder af compounds oralt til voksne zebrafisk af begge køn og i alle faser af yngletiden. Denne procedure ville være gældende for enhver undersøgelse, hvor nøjagtig oral dosering af en forbindelse er påkrævet.
Protocol
Representative Results
Discussion
Betydning
Denne teknik er en forbedring og tilvejebringer adskillige fordele over de to tidligere beskrevne teknikker til gavaging voksen zebrafisk. For det første anvendelsen af en svamp til at fastholde fisken tillader en person til at udføre proceduren, i modsætning til en tidligere beskrevet teknik, der kræver to personer. 7. andet kateter implantation slangen er mere fleksibel end IV katetre, som kan hjælpe med at minimere sekundær traume på grund til perforering ligelede…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Rockefeller University Comparative Bioscience center ydet støtte til dette projekt. Vi takker Janelle Monnas til teknisk bistand.
Materials
| Equipment | |||
| A sponge | |||
| 1-cc luer lock syringe | Becton Dickinson & Co | ||
| 22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut) | Braintree Scientific, Inc. | ||
| 1 22-G needle (cut, if needed) | Becton Dickinson & Co | ||
| pH meter | Hanna probe | ||
| 1 scalpel blade | |||
| [header] | |||
| Reagent/Material | |||
| MS-222 (Finquel) | Argent Laboratories |
Referências
- Royes, J. -. A. B., Chapman, F. . Preparing Your Own Fish Feeds. , (2009).
- Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg. Aquaculture. 196, 1-12 (1906).
- Langdon, C. Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae. Aquaculture. 227, 259-275 (2003).
- Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia. Aquaculture. 284, 151-158 (2008).
- Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish. Zebrafish. 8, 203-210 (2011).
- Goldsmith, J. R., Jobin, C. Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology. Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).
- Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection. Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).
- Marie, B., Huet, H., et al. Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes). Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).
- Canadian Council on Animal Care. . CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing. , (2005).
- Harper, C., Lawrence, C. . The Laboratory Zebrafish. , (2011).
- De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. Guidelines for the Care and Use of Fish in Research. ILAR Journal. 37 (4), (1995).
- Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia. Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).
- Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish. Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).
