Gavaging Adult Zebrafisch

Summary

Die zunehmende Verwendung von Zebrafisch als Tiermodell erfordert die Entwicklung effektiver Methoden für die Lieferung von bekannten Mengen von Verbindungen und Lösungen. Die Magensonde unten beschriebene Verfahren ermöglicht die orale Verabreichung von genauen Volumina der Lösung zuverlässig, sicher und effizient zu erwachsenen Zebrafisch.

Abstract

Der Zebrafisch ist zu einem wichtigen in vivo-Modell in der biomedizinischen Forschung. Effektive Methoden müssen entwickelt und verwendet werden, um Verbindungen oder Mittel in Lösungen für die wissenschaftliche Forschung zu liefern. Aktuelle Methoden zur Verabreichung von Verbindungen oral erwachsenen Zebrafisch sind ungenau wegen Variabilität in freiwilligen Verbrauch von den Fischen. Eine Magensonde Verfahren wurde entwickelt, um präzise Mengen von Infektionserregern zu liefern für das Studium in der biomedizinischen Forschung Zebrafisch. Adult Zebrafisch über 6 Monate alt waren betäubt mit 150 mg / l gepuffert MS-222 und eine Sonde mit 5 ul-Lösung mit flexiblen Katheter-Implantation Schlauch an einem Schnitt 22-G-Nadel Spitze. Der Schlauch wurde in die Mundhöhle des Zebrafisch abgesenkt, bis die Spitze des Schlauches verlängert an den Kiemen (etwa 1 cm). Die Lösung wurde anschließend langsam in den Darmtrakt injiziert. Diese Methode wirksam war 88% der Zeit, mit Fisch erholt ereignislos. DieseVerfahren ist auch effizient, wie eine Person 20-30 Fisch in einer Stunde eine Magensonde. Diese Methode kann verwendet werden, um genau zu verwalten Agenten für Infektionskrankheiten Untersuchungen oder aus Untersuchungen von anderen Verbindungen in erwachsenen Zebrafisch werden.

Introduction

Aktuelle Methoden zur Verabreichung von Verbindungen oral Zebrafisch umfassen Verabreichung von Verbindungen top-Beschichtung auf Futtermittel, gemischt in Gelatine Diäten ^1. bioencapsulated in Salzlösunggarnele ^2, gemischt mit Lipid verkapselten Diäten ^3, Wachs Spray Perlen ⁴ und über Gluten-basierte Ernährung. ⁵ Einschränkungen der diese Methoden der oralen Verabreichung umfassen hohe Auslaugraten und unvollständiger oder unvorhersehbare Verbindung Verbrauch für die einzelnen Fische. Diese Variablen sind problematisch, weil im Bereich der Infektionskrankheiten Studien, wohl wissend, die infektiöse Dosis verabreicht, um den Fisch kann entscheidend sein für das Studium Erfolg. Auch hat früheren Arbeiten gezeigt, dass bestimmte Verbindungen in Wasser Bäder verabreicht toxisch Läsion führen zu Kiemen, bevor die intestinale Wirkungen, die unter Studie sein kann auftreten Zebrafisch. ⁶

Gavage ist ein Standard-Verfahren in anderen Labor Tierarten verwendet werden, um präzise Mengen eines Produktes mit ak verwaltennown Konzentration für das Studium in der biomedizinischen und pharmazeutischen Forschung. Erst vor kurzem haben Methoden zur gavaging Zebrafisch wurde in der Literatur beschrieben. Eine Technik beschrieben ist ein Zwei-Personen-Verfahren unter Verwendung einer 24-G Katheterhülle an einem 2-20 ul Pipette bis 5 ul Lösung zu liefern. ⁷ Das beschriebene Verfahren hatte eine Sterblichkeitsrate von 8,7% und 39% auf dem ersten und zweiten Studie sind; die meisten der Sterblichkeit wurde trächtige Weibchen zugeschrieben. Die zweite Sonde beschriebene Technik verwendet stumpfen Sonde Spritzen bis 5 ul Lösung Medakas (Oryzias latipes). ⁸ Informationen zu Sterblichkeit wurde nicht zur Verfügung gestellt und den genauen Prozess der Durchführung der Magensonde wurde nicht beschrieben verwalten. Nach Angaben der kanadischen Rates über Animal Care und dem Labor Zebrafisch, bis zu 1% des Fisches Körpergewicht kann über eine Magensonde verabreicht werden. ^9,10 Unser Ziel war es, eine reproduzierbare, sichere und effiziente Methode der Bereitstellung von genauen Volumina von com entwickelnPfund oral erwachsenen Zebrafisch von beiden Geschlechtern und in allen Phasen der Reproduktion. Dieses Verfahren anwendbar wäre für jede Studie, in der genaue oraler Gabe einer Verbindung erforderlich ist.

Protocol

1. Vorbereiten des Betäubungsmittel-Lösung Bereiten Sie eine Lösung von 150 mg / L von MS-222 in System Wasser entweder aus einer Stammlösung oder aus der Pulverform. Überprüfen Sie den pH-Wert mit einem pH-Meter. Puffer mit Natriumbicarbonat wie nötig, bis der pH-Wert zwischen 7-7,5. Bereiten Sie einen Behälter des Systems Wasser frei von MS-222 für die Fische zu erholen in. die Recovery-Zeit ist in der Regel weniger als 1 min. 2. Vorber…

Representative Results

Beide Geschlechter von Fischen, darunter trächtige Weibchen wurden erfolgreich eine Sonde (Abbildung 1). Eine erfolgreiche Vorgang dauert weniger als eine Minute ohne Flüssigkeit gesehen Verlassen der Kiemen oder den Mund. Der Schlauch tritt leicht, ohne Gewalt, ohne Blut auf Katheterentfernung gesehen. Das Verfahren ist schnell, erfordert etwa 10 min auf 3 bis 4 Fisch Magensonde, mit einem Durchschnitt von 30-45 sec pro Fisch. Zebrafisch sollte nicht mit mehr als 5 ul jed…

Discussion

Bedeutung

Diese Technik ist eine Verbesserung und bietet mehrere Vorteile gegenüber den beiden zuvor beschriebenen Techniken für gavaging erwachsenen Zebrafisch. Zunächst ermöglicht die Verwendung eines Schwamms, um die Fische zurückzuhalten einer Person, das Verfahren durchzuführen, wie in einem zuvor beschriebenen Technik, die zwei Personen gegenüber. ⁷ Zweitens ist Katheterimplantation Schlauch flexibler als Venenkatheter, die helfen können, minimiert die durch Trauma zu e…

Materials

			Equipment
A sponge
1-cc luer lock syringe	Becton Dickinson & Co
22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut)	Braintree Scientific, Inc.
1 22-G needle (cut, if needed)	Becton Dickinson & Co
pH meter	Hanna probe
1 scalpel blade
			[header]
			Reagent/Material
MS-222 (Finquel)	Argent Laboratories