Summary
Den økende bruk av zebrafisk som en dyremodell krever utvikling av effektive metoder for levering av kjente mengder av nevnte forbindelser og oppløsninger. Den gavage prosedyren beskrevet nedenfor gir mulighet for oral levering av presise volumer av løsningen pålitelig, sikkert og effektivt til voksen sebrafisk.
Abstract
Den zebrafisk har blitt en viktig in vivo modell i biomedisinsk forskning. Effektive metoder må utvikles og utnyttes til å levere forbindelser eller agenter på løsninger for vitenskapelig forskning. Gjeldende metoder for administrering av forbindelser oralt til voksne zebrafisk er unøyaktig på grunn av variasjon i frivillige konsum av fisken. En sonde prosedyren ble utviklet for å levere presise mengder av smittestoffer til sebrafisk for studier i biomedisinsk forskning. Voksen zebrafisk over 6 måneders alder ble bedøvd med 150 mg / L av bufret MS-222 og gavaged med 5 pl av løsningen ved hjelp av fleksible kateter implantasjon slange festet til et kutt 22-G nålespissen. Den fleksible slangen ble senket ned i munnhulen av zebrafisk til spissen av produksjonsrøret forlenget forbi gjellene (ca. 1 cm). Løsningen ble deretter sprøytet sakte inn i tarmkanalen. Denne metoden var effektiv på 88% av tiden, med fisk utvinne uneventfully. DetteFremgangsmåten er også effektiv som en person kan magesonde 20-30 fisk i en time. Denne metoden kan benyttes for å administrere midler for smittsomme sykdommer studier, eller forstadier av andre forbindelser i voksen zebrafisk.
Introduction
Aktuelle metoder for administrering av forbindelser muntlig til sebrafisk inkludere administrering av forbindelser topp-belagt på fôr, blandet inn i gelatin dietter 1, bioencapsulated inn saltlake reker 2, blandet med lipid innkapslede dietter tre, voks spray perler fire og via gluten-baserte dietter. 5 Begrensninger disse metodene for oral administrasjon inkluderer høy utvasking priser og ufullstendige eller uforutsigbar sammensatte forbruk av hver enkelt fisk. Disse variablene er problematisk fordi i smittsomme sykdommer studier, vel vitende om infeksiøs dose gis til fisken kan være kritisk for studier suksess. Også har tidligere arbeid vist at visse forbindelser administreres i vannbad forårsake giftig lesjon til sebrafisk gjellene før de påvirker tarmen som kan være under studien oppstå. 6
Gavage er en standard metode som brukes i andre laboratorie dyrearter å administrere nøyaktige mengder av et produkt med aknown konsentrasjon for studier i biomedisinsk og farmasøytisk forskning. Bare nylig har metoder for gavaging sebrafisk blitt beskrevet i litteraturen. En teknikk som er beskrevet er en to-person med anvendelse av et 24-G kateter kappe festet til en 2-20 ul pipette for å levere 5 ul oppløsning. 7. Fremgangsmåten beskrevet hadde en dødelighet på 8,7% og 39% på den første og andre rettssaken, henholdsvis, og mesteparten av dødelighet ble tilskrevet drektige tisper. Den andre gavage teknikken beskrevet brukt stump-tipped tilførsel med sonde sprøyter for å administrere 5 ul oppløsning til medakas (Oryzias latipes). 8 Informasjon om dødeligheten ikke ble levert og nøyaktige prosessen for å utføre gavage ble ikke beskrevet. Ifølge den kanadiske Council on Animal Care og Laboratory Sebrafisk, opp til 1% av fiskens kroppsvekt kan administreres via sonde. 9,10 Vårt mål var å utvikle en repeterbare, sikker og effektiv metode for å levere presise mengder compounds muntlig til voksen sebrafisk av begge kjønn og i alle stadier av reproduksjon. Denne fremgangsmåten vil kunne anvendes for en hvilken som helst studie hvor nøyaktig oral dosering av en forbindelse er nødvendig.
Protocol
Representative Results
Discussion
Betydning
Denne teknikken er en forbedring, og gir flere fordeler over de to tidligere beskrevne teknikker for gavaging voksen sebrafisk. Først tillater bruk av en svamp for å holde fisken en person til å utføre prosedyren, i motsetning til en tidligere beskrevet teknikk krever to personer. Syv andre er kateter implantasjon slange mer fleksibel enn IV kateter, noe som kan bidra til å redusere sekundære trauma på grunn til perforeringen på samme måte som med butte spisser spr…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The Rockefeller University Comparative Biovitenskap Senter gitt støtte til dette prosjektet. Vi takker Janelle Monnas for teknisk assistanse.
Materials
| Equipment | |||
| A sponge | |||
| 1-cc luer lock syringe | Becton Dickinson & Co | ||
| 22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut) | Braintree Scientific, Inc. | ||
| 1 22-G needle (cut, if needed) | Becton Dickinson & Co | ||
| pH meter | Hanna probe | ||
| 1 scalpel blade | |||
| [header] | |||
| Reagent/Material | |||
| MS-222 (Finquel) | Argent Laboratories |
Referências
- Royes, J. -. A. B., Chapman, F. . Preparing Your Own Fish Feeds. , (2009).
- Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg. Aquaculture. 196, 1-12 (1906).
- Langdon, C. Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae. Aquaculture. 227, 259-275 (2003).
- Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia. Aquaculture. 284, 151-158 (2008).
- Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish. Zebrafish. 8, 203-210 (2011).
- Goldsmith, J. R., Jobin, C. Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology. Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).
- Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection. Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).
- Marie, B., Huet, H., et al. Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes). Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).
- Canadian Council on Animal Care. . CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing. , (2005).
- Harper, C., Lawrence, C. . The Laboratory Zebrafish. , (2011).
- De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. Guidelines for the Care and Use of Fish in Research. ILAR Journal. 37 (4), (1995).
- Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia. Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).
- Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish. Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).
