Neste artigo de vídeo, descrevemos um método automatizado para medir o efeito de fome ou saciedade em olfativo comportamento de busca de alimentos dependente na fruta Drosophila melanogaster mosca adulta.
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Artigo de método
A Single-fly Ensaio para comportamento de forrageamento em Drosophila
Neste artigo
Resumo
Resumo
Para muitos animais, a fome promove mudanças no sistema olfativo de uma forma que facilita a busca de fontes de alimentos apropriados. Neste artigo de vídeo, descrevemos um método automatizado para medir o efeito de fome ou saciedade em olfativo comportamento de busca de alimentos dependente na fruta Drosophila melanogaster mosca adulta. Em uma caixa à prova de luz iluminado por uma luz vermelha que é invisível para as moscas de fruta, uma câmera ligada ao software de aquisição de dados personalizado monitora a posição de seis moscas simultaneamente. Cada mosca se limita a caminhar em arenas individuais contendo um odor de alimentos no centro. As arenas de ensaio repousar sobre um piso poroso que funciona para prevenir a acumulação de odor. A latência para localizar a fonte de odor, uma métrica que reflecte a sensibilidade olfactiva em diferentes estados fisiológicos, é determinada por análise de software. Aqui, discutimos os mecanismos críticos de executar este paradigma comportamental e abranger questões específicas sobre mosca loading, a contaminação odor, temperatura do ensaio, a qualidade dos dados e análise estatística.
Introdução
Unidos da fome promover dois tipos de comportamentos apetitivas: busca de alimentos e consumo de alimentos 1. Este ensaio comportamental simples é útil para o estudo de comportamentos quimiotáticos associados forrageamento 2,3. Especificamente, ele rastreia a posição da mosca, velocidade de caminhada e latência para localizar um alvo odor de alimentos. Latência de encontrar comida serve como métrica para medir as mudanças na sensibilidade do sistema de detecção de odor da mosca a jusante das alterações no seu estado appetitive interno. Uma versão manual deste ensaio foi utilizado anteriormente para mostrar a sinalização do receptor de GABA-B é i....
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Protocolo
1. Fly Recolha e fome
- Rear as moscas experimentais sob condições de temperatura e umidade controladas (por exemplo, 21 ° C, 50-60% de umidade relativa) em um ciclo claro / escuro de 12 horas.
- Colete feminino voa no dia da eclosão e colocá-los, juntamente com 4-5 machos, em novos frascos de alimentos (máximo de 30 por frasco). Idade voa de 2-5 dias.
- Prepare as câmaras, fly fome.
- Empurrar um único tecido (4,8 x 8,4 polegadas) para a parte inferior de um frasco de plástico vazio. Molhar o tecido com água destilada. Use um objeto para empurrar para baixo sobre o tecido e esprema delicadamente o excesso de água.
- I....
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Resultados
O software de análise de dados e a disposição, um exemplo dos quais pode ser visto na Figura 1, são utilizados para avaliar o desempenho de cada mosca durante a sua 10 min ensaio de acordo com um conjunto de critérios de análise. Os seguintes critérios são utilizados para determinar se os dados de cada mosca serão utilizados para análise de dados e são projetados para eliminar as moscas que não são capazes de realizar a tarefa de busca de alimentos, devido a lesão, doença, estresse ou falta de motivação.......
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Discussão
Neste protocolo, descrevemos um procedimento passo-a-passo para o ensaio de comportamento de busca de alimentos. Além de odores alimentares relacionados com, mas também pode ser adaptada para o estudo da capacidade de voar para localizar outros objectos de odor. Por exemplo, ele pode ser aplicado para o estudo do comportamento de localização mate em moscas macho 3 Há várias considerações adicionais para este protocolo que vamos mencionar aqui em relação a este procedimento.:
Em pr.......
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Divulgações
Os autores declaram que não há interesse financeiro concorrente.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por bolsas de investigação para JWW do Instituto Nacional de Saúde (R01DK092640) e National Science Foundation (0.920.668).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Espectro | de vinagre de maçã | disponível comercialmente | |
| Agarose, Tipo VII | Sigma-Aldrich | A0701 | baixa temperatura gelificante agarose |
| teste de acrílico | placa personalizada | contém 6 arenas. Cada arena tem 60 mm de diâmetro e 6 mm de altura. Consulte os diagramas de placas de teste para medições específicas. | |
| LabVIEW V.8.5 | 776670-09 | National Instruments | para programas: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi NOTA: "elapsed time.vi", "time into file.vi" e "two object detect.vi" são sub-rotinas incluídas que devem estar disponíveis para que o programa principal de aquisição de dados "FlyTracking--Six zones.vi" seja executado. |
| LabVIEW Vision 8.5 | |||
| Software de aquisição LabVIEW Vision 8.5 | |||
| LabVIEW Vision Builder AI 3.5 | |||
| Igor Pro V.6 | Wavemetric, Inc. | plataforma para macro: Análise de Dados para Rastreamento de Moscas--Seis Zonas | |
| Basler scA1390-17fm | National Instruments | 779980-01 | Câmera Digital NOTA: driver para câmera disponível em lente Baslerweb.com |
| 8 mm | National Instruments | 780024-01 | Lente para Câmera Digital Basler |
| Placa Difusora de Vidro Moído | Edmund Optics | personalizado | Difunde luz, 25 cm x 30 cm |
| US Std. No. 100 | Fischer Scientific | 04-881X | Peneira com abertura nominal de 150 μ m |
| Opção de iluminação 1 | |||
| LED retroiluminação LED 660 nm (20 cm x 20 cm) | Spectra West | BL47192 | uma opção de iluminação mais simples, mas mais cara. |
| Fonte de alimentação para LED | Backlight Spectra West | ||
| Opção de iluminação 2 | |||
| 660 nm LEDs | Superbrightleds | RL5R1330 | Comprimento de onda 660 nm (aproximadamente 7 x 7 matriz de LED para um painel de 14,7 polegadas x 9,75 polegadas) |
| Fonte de alimentação DC linear | GW Instek | GPS-1830D | Fonte de alimentação para painel de LED |
| Placa de ensaio sem solda | Digikey | 922354-ND | Placa de ensaio para LEDs |
Referências
- Dethier, V. G. The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding. , Harvard University Press. (1976).
- Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search. Cell.
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Reimpressões e permissões
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