Na migração celular in vitro e invasão Ensaios

Summary

Comumente usado, são descritos métodos altamente acessíveis para analisar a migração celular e invasão in vitro. O primeiro método é o ensaio de encerramento de feridas de células que mede a mobilidade celular. O segundo método é o ensaio de migração e invasão transwell que avalia o quimiotáctica e capacidade invasiva de células.

Abstract

A migração é uma propriedade fundamental das células vivas e crítica para o desenvolvimento normal, resposta imune e processos de doenças, como metástase e inflamação do câncer. Os métodos para examinar a migração celular são muito úteis e importantes para uma ampla gama de pesquisas biomédicas, como biologia do câncer, imunologia, biologia vascular, biologia celular e biologia do desenvolvimento. Aqui, usamos a migração e invasão de células tumorais como exemplo e descrevemos dois ensaios relacionados para ilustrar os métodos comumente usados e facilmente acessíveis para medir esses processos. O primeiro método é o ensaio de fechamento de ferida de cultura de células, no qual um arranhão é gerado em uma monocamada de células confluentes. A velocidade de fechamento da ferida e migração celular pode ser quantificada tirando fotos instantâneas com um microscópio invertido regular em vários intervalos de tempo. Um comportamento migratório celular mais detalhado pode ser documentado usando o sistema de microscopia de lapso de tempo. O segundo método descrito neste artigo é o ensaio de migração e invasão de células transwell que mede a capacidade de motilidade celular e invasividade em direção a um gradiente quimio-atrativo. É nosso objetivo descrever esses métodos de maneira altamente acessível para que os procedimentos possam ser realizados com sucesso em laboratórios de pesquisa, mesmo apenas com a configuração básica de biologia celular.

Introduction

Motilidade é uma característica essencial de células vivas. A migração celular está envolvido na concepção de vida, o desenvolvimento embrionário, a resposta imunitária, e muitos processos patológicos, tais como a metástase do cancro e inflamação ^1-9. Portanto, métodos para estudar o comportamento migratório das células são ferramentas de pesquisa muito útil para uma vasta gama de disciplinas em ciências biomédicas, biologia, bioengenharia, e áreas afins.

O estudo da migração de células na pesquisa do câncer é de particular interesse como a principal causa de morte em pacientes com câncer está relacionado à progressão metastáti....

Protocol

1. Cultura Celular Wound Encerramento Assay

1. Separar as células a partir da placa de cultura de tecido usando 0,25% de solução de tripsina-EDTA. Células de pellets em um tubo de 15 ml por centrifugação, aspirar o sobrenadante e as células em meios de cultura re-suspensão. Placa o número adequado de células em uma placa de 6 poços para 100% de confluência em 24 horas.
   Nota: Os testes podem ser necessários para determinar o tempo e o número de células para atingir 100% de confluência devido ao tipo de célula e a dimensão do bem a ser utilizado (por exemplo, 1 x 10 ⁶ B16F10 células de melanoma são semeadas em um poço de uma 6 poços da placa, ....

Results

O ensaio de encerramento de feridas e no ensaio de migração de células Transwell aqui apresentados foram realizadas utilizando células de melanoma de ratinho B16F10 como um sistema modelo. No ensaio de encerramento de feridas, B16F10 células foram semeadas numa placa de 6 poços de cultura de tecidos e crescidas até 100% de confluência em 24 horas. Uma ferida de aproximadamente 700 m de largura foi gerada usando uma ponteira eo fechamento da ferida (migração de células) foi gravado usando a microscopia de lapso de tempo........

Discussion

A migração celular é um aspecto importante para estudar na pesquisa do câncer e também pode ser aplicado a estudos de cura de desenvolvimento, imunológicos e ferida. O ensaio de cultura de células de feridas e de fecho da migração celular e invasão transwell ensaios de revelar a informação detalhada do comportamento migratório das células e pode ser utilizado para investigar os mecanismos moleculares da migração celular ^1,2,10,14. Nosso estudo utilizou estes testes de motilidade celular para determinar as cap.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dulbecco' s meio de águia modificado (DMEM)	Gibco	11995-073
Soro bovino fetal (FBS)	Gemini	100106
albumina de soro bovino (BSA)	Sigma-Aldrich	A4503-50G
Tripsina EDTA 0,25%	Gibco	25200-056
Dulbecco ' s solução salina tamponada com fosfato (DPBS)	Gibco	14190-250
Cristal violeta	Sigma	C0775-100G	Dissolvido em água a 0,2%
Tampão de dissociação celular	Gibco	13151-014
Incubadora de cultura de células	Thermo Fisher Scientific		Modelo # 3145
Capuz de biossegurança SterilGARD	The Baker Company, Inc.		Modelo # VBM-600
EVOS Fl microscópio invertido	Thermo Fisher Scientific		Modelo # AMF-4302-US
Placa de cultura de tecidos	Becton Dickinson	353046	O número de catálogo varia dependendo do tipo de placa de cultura
Corning Transwell insert	Fisher	07-200-150	O número de catálogo varia dependendo do tamanho do poro da membrana