में सहज हरकत गतिविधि का निर्धारण<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em
Summary
ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर ऐसे सहज हरकत गतिविधि के रूप में व्यवहार को प्रभावित है कि आनुवंशिक या पर्यावरणीय जोड़तोड़ का अध्ययन करने में उपयोगी होते हैं. यहाँ हम अवरक्त बीम और सहज हरकत गतिविधि यों तो डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर के साथ नज़र रखता इस्तेमाल करता है कि एक प्रोटोकॉल का वर्णन.
Abstract
ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर व्यवहार को प्रभावित है कि पर्यावरण और आनुवंशिक जोड़तोड़ का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल जीव के रूप में इस्तेमाल किया गया है. ऐसा ही एक व्यवहार सहज हरकत गतिविधि है. यहाँ हम ड्रोसोफिला आबादी पर नज़र रखता है और एक समय में कई दिनों के लिए मक्खियों का सहज हरकत गतिविधि की सतत निगरानी की अनुमति देता है कि एक ट्रैकिंग प्रणाली का इस्तेमाल करता है कि हमारे प्रोटोकॉल का वर्णन. इस विधि, सरल, विश्वसनीय, और उद्देश्य है और उम्र बढ़ने, लिंग, भोजन की गरमी सामग्री में परिवर्तन, दवाओं के अलावा, या मानव रोगों कि नकल आनुवंशिक जोड़तोड़ के प्रभाव की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Introduction
फल मक्खियों, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर, सीखने और स्मृति, सामाजिक संपर्क, आक्रामकता, नशीली दवाओं के दुरुपयोग, नींद, संवेदी समारोह, प्रेम प्रसंग, और 1,2 संभोग के रूप में जटिल व्यवहार अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान मॉडल जीव के रूप में इस्तेमाल किया गया है. कई प्रोटोकॉल के माध्यम से अध्ययन किया गया है कि एक व्यवहार सहज हरकत गतिविधि है. नकारात्मक geotaxis ड्रोसोफिला गतिविधि को मापने के लिए विकसित की पहली तरीकों में से एक था, और इस प्रोटोकॉल मक्खियों कंटेनर 1,3 की तह तक हिल गया के बाद शीशी की एक निश्चित ऊंचाई तक पहुँचने कि मक्खियों का प्रतिशत मापने शामिल है. इस विधि में, सीधा सस्ती होने के फायदे हैं, और यह किसी भी प्रयोगशाला में किया जा सकता है किसी विशेष उपकरण की आवश्यकता नहीं होती है. यह मक्खी गतिशीलता 3 पर विभिन्न आनुवंशिक जोड़तोड़ के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, यह समय और श्रम गहन एक हैएन डी कारण शीशियों और मानव रिकॉर्डिंग के चर झटकों को पूर्वाग्रह की संभावना है.
नकारात्मक geotaxis विधि नीचे करने के लिए मक्खियों के झटकों निम्नलिखित मक्खी शीशियों की तस्वीरें लेता है जो तेजी से चलने का नकारात्मक geotaxis (रिंग) विधि 4,5, के विकास के द्वारा पर सुधार हुआ है. इस प्रोटोकॉल का लाभ इसकी संवेदनशीलता और एक ही समय में मक्खी शीशियों की एक बड़ी संख्या का परीक्षण करने की संभावना है. हालांकि, इस प्रोटोकॉल अभी भी मानव त्रुटि के लिए क्षमता है, और केवल नकारात्मक geotaxis के उपाय. अन्य प्रयोगशालाओं हरकत गतिविधि 6 निर्धारित करने के लिए संस्कृति शीशियों में साधारण अवलोकन का इस्तेमाल किया है.
हाल ही में मक्खी हरकत गतिविधि को मापने के लिए कई वीडियो रिकॉर्डिंग सिस्टम विकसित किया गया है. एक वीडियो निगरानी प्रोटोकॉल 7 रिकॉर्डिंग से पहले समायोजन के लिए समय प्रदान करता है. Slawson एट अल द्वारा वर्णित विधि. भी movemen को रोकने के लिए एक हवाई नाड़ी का उपयोग करता हैसंभावित जानवरों 7 पर तनाव हो सकता है जो रिकॉर्डिंग के शुरू, जब तक टी. इस विधि औसत गति, अधिकतम गति, गति में समय बिताना, आदि एक और तीन आयामी ट्रैकिंग प्रणाली मुक्त उड़ान टेकऑफ़ 8 ~ 0.2 सेकंड के दौरान व्यक्तिगत मक्खियों के अधिक से अधिक वेग के उपायों पर जानकारी प्रदान करता है. एक तीन आयामी वीडियो निगरानी प्रोटोकॉल GFP और मक्खी गतिशीलता 9 निर्धारित करने के लिए प्रतिदीप्ति का पता लगाने के लिए अनुमति फिल्टर के साथ लगे कई कैमरों व्यक्त मक्खियों का उपयोग करता है. इस प्रोटोकॉल में मक्खियों की वजह से ड्रोसोफिला संस्कृति की आकृति में संभावित है जो बेलनाकार उड़ान पैटर्न, प्रदर्शन करते हैं 10 शीशियों. इस विधि दो मक्खियों 11 का सहज आंदोलन को मापने की अनुमति देता है कि एक गुंबद का उपयोग करके सुधार किया गया था. स्वचालित रूप से नजर रखने और ड्रोसोफिला की व्यक्तिगत और सामाजिक व्यवहार यों तो एक कैमरा का उपयोग करता है कि एक उच्च throughput विधि भी 12 वर्णित किया गया है. Zou एटअल. पीने, खाने, उड़ान, चलती है, जीवन भर के व्यवहार और इस तरह के विश्राम के रूप में आंदोलनों रिकॉर्ड करने के लिए दो कंप्यूटर की मदद से कैमरे का उपयोग करता है, या व्यक्तिगत tephritid फल की मौत 13 मक्खियों कि एक व्यवहार की निगरानी प्रणाली (बीएमएस) विकसित की है. कई अन्य वीडियो सिस्टम मक्खी व्यवहार गतिविधि 14,15 नजर रखने के लिए विकसित किया गया है.
यहाँ हम जनसंख्या पर नज़र रखता है कि इस्तेमाल ड्रोसोफिला गतिविधि बढ़ाता के लिए एक विधि का वर्णन. इन पर नज़र रखता है एक 12 घंटे की दिन रात प्रकाश चक्र पर 25 डिग्री सेल्सियस तापमान और आर्द्रता नियंत्रित इन्क्यूबेटरों में रखे जाते हैं. प्रत्येक आबादी पर नजर रखने के लिए तीन अलग अलग ऊंचाई पर तैनात छल्ले में रखा अवरक्त बीम हैं. एक मक्खी के छल्ले के पार ले जाता है हर बार यह है कि स्वतंत्र रूप से रिकॉर्ड एक माइक्रोप्रोसेसर द्वारा दर्ज की गई और शीशी के भीतर मक्खियों की गतिविधि में गिना जाता है, जो अवरक्त किरण, बीच में आता है. एक माइक्रोप्रोसेसर उपयोगकर्ता परिभाषित interva पर कंप्यूटर को शीशी के भीतर कुल गतिविधि अपलोडLS कि 1 सेकंड से 60 मिनट के लिए भिन्न हो सकता है. यहाँ वर्णित विधि मक्खियों नए वातावरण को समायोजित करने के लिए पर्याप्त समय प्रदान करता है और मक्खियों के रूप में कई 120 के रूप में आबादी का सहज हरकत गतिविधि का एक साथ मापने के लिए अनुमति देता है. इसके अलावा, हम भोजन की तैयारी का वर्णन रखरखाव मक्खी, गतिशीलता आबादी तापमान नियंत्रित इन्क्यूबेटरों में नज़र रखता है, और परिणाम को प्रभावित कर सकता है कि संभावित कारकों की स्थापना. इस विधि विभिन्न पर्यावरणीय या आनुवंशिक संशोधनों मक्खियों की सहज हरकत गतिविधि को प्रभावित कैसे अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
मक्खियों का सहज हरकत गतिविधि उम्र, आनुवंशिक पृष्ठभूमि, और लिंग 2,13,18,19 के रूप में कई कारकों से प्रभावित होता है. इसके अलावा, इस तरह के भोजन, वातावरण के तापमान, विभिन्न दवाओं के अलावा, और दिन / रात प्रकाश च?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (बीआर करने AG023088) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Sucrose FCC Food Grade 100 LB, | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90471380 | |
| Brewer’s Yeast | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90331280 | |
| Drosophila Agar Fine | SciMart | DR-820-25F | |
| Cornmeal | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90141125 | |
| Methyl4-hydroxybenzoate, tegosept | Sigma | H5501-5KG | |
| EtOH | Pharmco-AAPER | 111000200 | |
| Active Dry Yeast | Fisher Scientific | ICN10140001 | |
| Fly CO2 pad | LabScientific | BGSU-7 | |
| Stereo Microscope | Olympus | SZ40 | |
| Drosophila carbon dioxide (CO2) tank | Airgas | UN1013 | |
| Small paint brush for pushing the flies | |||
| Shell vial wide | Fischer Scientific | AS519 | |
| Buzzplugs for wide plastic vials | Fischer Scientific | AS275 | |
| Glass vials (25x95mm) | Fischer Scientific Kimble 60931-8 | AS-574 | |
| Sponge plugs for glass vials | SciMart | DR-750 | |
| Drosophila Food Dispenser | Applied Scientific (Fischer Scientific) | AS780Q | |
| DPM Drosophila Population Monitor | Trikinetics Inc. | ||
| DC Power Supply with line cord | Trikinetics Inc. | ||
| PSIU9 The Power Supply Interface Unit | Trikinetics Inc. | ||
| Telephone cables and 5 way splitters | Trikinetics Inc. | ||
| Universal Serial Bus (USB) hardware | Trikinetics Inc. | ||
| Macintosh or Windows PC with UCB port | |||
| DAMSystem308X Data Acquisition Software for Macintoch OSX (Intel) | www.trikinetics.com | ||
| DAMSystem308 Data Acquisition Software for Windows PC (XP/Vista/7) | www.trikinetics.com | ||
| DAMFileScan108X software for Macintosh | www.trikinetics.com | ||
| DAMFileScan108X software for Windows PC (XP/Vista/7) | www.trikinetics.com | ||
| USB software (PSIUdrivers.zip) | www.trikinetics.com | ||
| DAMSystem Notes 308 | (http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf |
Referências
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