Um Modelo de Aprendizagem lateralizados Odor em ratos recém-nascidos para Dissecando Formação Neural dos circuitos Consolidação da Memória

Resumo

Este protocolo introduz o aprendizado precoce da preferência de odor lateralizado em ratos usando oclusão aguda de naris única. A aprendizagem lateralizada permite o exame de resultados comportamentais e mecanismos biológicos subjacentes dentro dos mesmos animais, reduzindo a variância induzida por designs entre animais. Este protocolo pode ser usado para investigar os mecanismos moleculares que sustentam o aprendizado precoce de odores.

Resumo

Filhotes de rato durante um período pós-natal crítico (≤ 10 dias) prontamente formam uma preferência por um odor associado a estímulos que imitam o cuidado materno. Essa memória de preferência pode durar de horas a dias, até mesmo ao longo da vida, dependendo dos parâmetros de treinamento. O aprendizado precoce da preferência por odores nos fornece um modelo no qual as mudanças críticas para uma forma natural de aprendizado ocorrem no circuito olfativo. Uma característica adicional que o torna uma ferramenta poderosa para a análise dos processos de memória é que o aprendizado precoce da preferência de odor pode ser lateralizado por meio da oclusão de naris único dentro do período crítico. Isso se deve à falta de conexões comissurais anteriores maduras dos hemisférios olfatórios nessa idade precoce. Este trabalho descreve protocolos comportamentais para aprendizado de odor lateralizado usando tampões nasais. A oclusão aguda e reversível da narina minimiza os danos teciduais e neuronais associados à oclusão de longo prazo e métodos mais agressivos, como a cauterização. O modelo de aprendizado de odor lateralizado permite a comparação dentro do animal, reduzindo muito a variação em comparação com os projetos entre animais. Este método tem sido usado com sucesso para sondar as mudanças de circuito no sistema olfativo produzidas pelo treinamento. As direções futuras incluem a exploração dos fundamentos moleculares da memória de odor usando este modelo de aprendizado lateralizado; e correlacionar a mudança fisiológica com a força e a duração da memória.

Introdução

O olfato é a modalidade sensorial primário em roedores, sem o que não seria capaz de navegar ou sobreviver em seu ambiente com sucesso. É especialmente importante para os filhotes recém-nascidos, que nem podem ver, nem ouvir, durante a primeira semana pós-natal, para usar o olfato para localizar a sua mãe para alimentar ^1. Como resultado, os filhotes de ratos recém-nascidos pode ser condicionado a preferir odores com manipulações experimentais simples. Uma variedade de estímulos têm sido usados ​​como estímulo incondicionado (UCS) para induzir respostas condicionadas a novos odores (estímulo condicionado, CS) em recém-nascidos, incluindo o ambiente de nidi....

Protocolo

Sprague Dawley (Charles River) filhotes de ambos os sexos são usados. As ninhadas são abatidos para 12 no PD1 (nascimento sendo PD0). Os reservatórios são mantidos num ciclo claro / escuro de 12 horas de luz, com acesso ad libitum a comida e água. Os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê Animal Care Institucional da Universidade Memorial.

1. Nose plug Construção

NOTA:. Este procedimento foi adaptado e modificado a partir de Cummings et al (1997) ^35.

1. Aquire tubulação de polietileno de 20 e 3-0 fio de sutura de seda.
2. Corte um pequeno pe....

Resultados

Aqui vamos rever alguns dos resultados previamente estabelecidos ²⁴ para demonstrar a eficácia da oclusão naris em isolar entrada odor e aprender a um hemisfério, ea reversibilidade do método.

Oclusão Único naris durante o treinamento preferência odor precoce leva a uma memória odor lateralizado ^24. A memória é confinado ao naris poupados (Figura 3). Quando os filhotes são testados quanto à preferência de odor com a mesma naris ocluído durante a formaçã.......

Discussão

O modelo de aprendizagem e memória odor lateralizado em filhotes de rato dentro de uma janela de tempo crítico foi estabelecido pela primeira vez por Hall e colegas. Em uma série de estudos ^33,34,36, eles mostraram que uma memória preferência odor poderia ser lateralizado por odores + leite pares para um naris em PD 6 em filhotes de ratos. Memória preferência era robusto quando o mesmo naris estava aberta durante o treinamento e teste, mas não observada quando o naris oclusa foi desbloqueado e testado. No ent.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubulação de polietileno 20	427406 intramédica		Não radiopaca, não tóxica
3-0 Fio de sutura de seda	Syneture	Sofsilk	Graxa de silicone não absorvente
	Warner Instrument	64-0378	Gel de
xilocaína 2%	AstraZeneca	Prod. No 061	Geléia de cloridrato de lidocaína, comprada em farmácia local
Pincel	Dynasty	206R	Tamanho semelhante/outras marcas também funcionam
Extrato de hortelã-pimenta	Sigma-Aldrich	W284807	Outras marcas também devem estar bem Caixa
de treinamento	N/A feita sob medida		Caixa de acrílico (20 x 20 x 5 cm3), consulte Figura 2A. Os parâmetros e o material da caixa não são críticos e podem ser modificados. O material utilizado deve ser inodoro e não absorver odores
Câmara de teste	N/A feito sob medida		Aço inoxidável (30 x 20 x 18 cm3), consulte Figura 2B. Os parâmetros e o material para a câmara não são críticos e podem ser modificados. Por exemplo, uma câmara de acrílico em vez de uma de aço inoxidável pode ser usada
anticorpo pCREB	Sinalização Celular	9198	Ser 133 (87G3) Coelho mAb
Hidrato de cloral	Sigma-Aldrich	C8383	N/A
Paraformaldehype	Sigma-Aldrich	P6148	N/A
Sacarose	Sigma-Aldrich	S9378	N/A

inodoro