Summary

の高品質のデジタルビデオを買収<em>ショウジョウバエ</em横から見た>幼虫と大人の行動

Published: October 04, 2014
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Summary

ここでは、 ショウジョウバエの成体および横方向の視点から幼虫の変異体の表現型の高品質のデジタルビデオを取得するためのシンプルで広くアクセス顕微鏡技術が記載されている。

Abstract

キイロショウジョウバエは、神経系の機能を研究するための強力な実験モデル系である。神経系の機能障害を引き起こす遺伝子突然変異は、多くの場合、実行可能な幼虫と適切にテキストを記述するか、完全に単一の写真画像では表現が困難運動の欠陥表現型を持っている大人を作り出す。科学的な出版の現在のモードが、しかし、原稿を伴うために補足資料などのデジタル映像メディアの提出をサポートしています。ここでは、横方向の両方の観点から、ショウジョウバエの幼虫と大人の表現型の高品質のデジタルビデオを取得するためのシンプルな、そして幅広いアクセスができる顕微鏡技術が記載されている。それは異常な機関車の挙動に微妙な違いや変化の観察と分析を可能にするため、サイドビューから幼虫と大人の運動のビデオが有利である。私たちは正常に視覚化し、aberran定量化するために技術を使用していたtはグルーミングを含む成人の変異体の表現型と行動に加えて、3齢幼虫に行動をクロール。

Introduction

一般的な果物飛ぶキイロショウジョウバエは、神経系1-3の機能を研究するための強力な実験モデル系である。進化人間と神経系の構造と機能の保全だけでなく、遺伝子操作の容易性と遺伝子ツールの広大な配列は、ヒトの神経変性疾患4をモデル化するために、ショウジョウバエの初演生物を作る。神経系の機能障害を引き起こす遺伝子突然変異は、多くの場合、障害のある歩行を実現可能変異体幼虫と大人のショウジョウバエにつながる。神経系欠損変異株で観察された表現型は、歩行、異常な調整、および成人における痙性運動の速度だけでなく、体壁筋系の蠕動収縮の欠損、および幼虫の部分的な麻痺の減少、。これらの表現型は、ハイスループット遺伝子スクリーニングおよび突然変異体の幼虫5の移動アッセイの開発に利用されている、運動機能障害を定量化し、神経系の機能に必要な遺伝子を同定することを目的と6および成人7-10 ショウジョウバエ 。これらのアプローチは、幼虫と大人の機関車の挙動を定量化するために極めて有用であるが、これらはそれぞれ、特定の異常な行動についての定性的な情報を伝えることができない。変異型3齢幼虫が行動アッセイで変更された歩行パラメータを示すことができるしながら、これはクロール·サイクル中にリズミカルな蠕動性収縮、協調の一般的な不足、または後部胴体の部分的な麻痺の変化の結果である場合、それは不明かもしれ壁の筋肉組織。ここでは、 ショウジョウバエの成体および横方向の視点から幼虫機関車の表現型の高品質のデジタルビデオを取得するためのシンプルな、そして幅広いアクセスができる顕微鏡技術が記載されている。横視点から取得されたデジタルビデオは、locomotivの微妙な違いを直接観察や分析を可能にするより有益なサイドビューの方向から電子の振る舞い​​。

Protocol

1ステレオ顕微鏡システム注:このプロトコルは、簡単にビデオを取得する機能を備えたデジタルカメラに接続された事実上すべての実体顕微鏡システムに適用可能であるが、詳細は(材料/機器の表)の研究室で使用されるシステム上に設けられている。 商業デジタルカメラに接続された三眼実体顕微鏡を使用してデジタルビデオを取得します。 結合する…

Representative Results

私たちは、 スタスミン遺伝子 ( 図2)14の機能の喪失に関連した幼虫の行動表現型を獲得し、定量化するためにこの技術を正常に使用しています。 スタスミン遺伝子は、可溶性チューブリンのプールからチューブリン二量体を分割し、微小管を結合し、その分解を促進する微小管15,16調節タンパク質をコードしている。スタスミン機能が末?…

Discussion

神経系の機能を研究するためのモデル系としてキイロショウジョウバエの強みは主に利用可能な強力な遺伝子ツールの収束と開発された堅牢な行動アッセイ幅広い由来する。ここでは、 ショウジョウバエの成体および横方向の視点から幼虫機関車の表現型の高品質のデジタルビデオを取得するためのシンプルな、そして幅広いアクセスができる顕微鏡技術を提示する。私たちは…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

著者らは、ビデオのナレーションを提供するための技術支援やサポート、ジェームズ·バートンのためのアレクサンドラオピーを承認したい、付属のビデオに登場するためのラモナFlatzとJoellenスウィーニー。この作品は、MJマードック公益信託(JEDに認可番号2012205)によってサポートされていました。

Materials

Trinocular Stereozoom Microscope Olympus Corporation SZ6145TR ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount
1X C-mount Leeds Precision Instruments LSZ-1XCMT2
Digital Camera Coupler (43mm thread) Qioptiq Imaging Solutions 25-70-10-02
58mm to 48mm Step Down Ring B&H Video GBSDR5848
48mm to 43mm Step Down Ring B&H Video GBSDR4843
Lensmate Adapter Kit for Canon G10 LensMateOnline.com
Canon PowerShot G10 Digital Camera Canon U.S.A., Inc.
1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette Denville Scientific U8650-4

Referências

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Citar este artigo
Zenger, B., Wetzel, S., Duncan, J. Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective. J. Vis. Exp. (92), e51981, doi:10.3791/51981 (2014).

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