L'isolement et l'aide de sections d'encéphalopathie mésentérique artère et la veine comme les essais biologiques pour tester vasoactivité dans l'intestin grêle
Summary
L'intestin grêle est fréquemment exposé à des toxines qui peuvent influer sur la circulation sanguine et un impact négatif sur l'absorption des nutriments. L'utilisation d'un multimyograph et l'artère mésentérique et la veine isolats, composés ou des toxines d'intérêt peut être projeté pour vasoactivité.
Abstract
Les systèmes gastro-intestinaux de mammifères sont constamment exposés aux composés (désirables et indésirables) qui peuvent avoir un effet sur le flux sanguin vers et à partir de ce système. Les changements dans le flux sanguin vers l'intestin grêle peuvent avoir des effets sur les fonctions de l'organe d'absorption. Intérêt particulier pour les toxines libérées de produits alimentaires par des processus de fermentation et la digestion a développé chez les ruminants comme un domaine où des économies productives pourraient être améliorées. La vidéo associée à cet article décrit un essai biologique in vitro mis au point pour sélectionner des composés pour vasoactivité dans des sections isolées de bovins artère mésentérique et la veine à l'aide d'un multimyograph. Une fois que les vaisseaux sanguins sont montés et équilibrés dans le myographe, l'essai biologique elle-même peut être utilisé: un outil de criblage pour évaluer la réponse contractile de la vasomotricité ou de composés d'intérêt; déterminer la présence de types de récepteurs de ciblage sur le plan pharmacologique avec des récepteurs spécifiques agonistes; déterminer le rôle d'un récepteur avec la présence d'un ou plusieurs antagonistes; ou déterminer les interactions potentielles de composés d'intérêt avec des antagonistes. Grâce à tout cela, les données sont collectées en temps réel, le tissu prélevé chez un seul animal peut être exposé à un grand nombre de différents traitements expérimentaux (un avantage in vitro), et représente le système vasculaire de chaque côté du lit capillaire pour fournir une précision image de ce qui pourrait se passer dans la afférents et efférents approvisionnement en sang soutenant l'intestin grêle.
Introduction
Modifications du débit sanguin à un lit de tissu peuvent avoir un impact important sur la fonction des organes. Une fonction primaire de l'intestin grêle est l'absorption des nutriments. Le débit sanguin artériel à la surface d'absorption de l'intestin est nécessaire pour l'augmentation de l'absorption et la circulation sanguine nutriments pour aider à l'absorption des nutriments comme digesta se déplace le long de la surface 1. Une diminution du flux sanguin peut provoquer une réduction de l'absorption des nutriments en raison d'une diminution du gradient de transépithélial 2. En plus de nutriments, l'intestin grêle peut également être exposé à des métabolites secondaires, des médicaments ou des toxines qui exercent un effet sur le flux sanguin localisé dans le mésentère. Dans le cas de l'animal ruminant, les composés peuvent être libérés à partir d'un aliment (par exemple, les nutriments, tels que des acides aminés, ou des toxines telles que les alcaloïdes de l'ergot) par l'intermédiaire des processus de fermentation de l'intestin antérieur. Si ces composés survivre le métabolisme microbien de la fermentation ruminale, ils sont maintenant disponibles pour l'absorptionou interaction en se déplaçant à travers le tractus gastro-intestinal de l'animal.
Il ya un certain nombre de différentes méthodes disponibles pour mesurer le débit sanguin in vivo (par exemple, l'échographie Doppler, qui habite débitmètres sanguins, les microsphères radiomarquées et techniques indicateur-dilution) qui permettent l'évaluation des différents scénarios expérimentaux ou traitements. Cependant, pour obtenir des informations sur les propriétés mécaniques ou pharmacologiques du muscle lisse vasculaire, les méthodes sont restées limitées aux grands navires jusqu'à Mulvany et Halpern 3 a publié un article décrivant une technique utilisant un fil monté préparations d'anneaux vasculaires dans un myographe. Depuis la mise au point de cette technique, des modifications continuent d'être apportées aux systèmes de myographe associés qui permettent une variété d'applications différentes pour l'évaluation des structures tubulaires. Le système a également été adapté pour utiliser des barres fixes pour le montage de plus grands navires 4 où perfusiontechniques ne sont pas souhaitées.
En raison de différences dans les vaisseaux d'origines et de distinctions anatomiques différents dans les mêmes bateaux de différentes espèces animales, des données de navire et type d'animal ne peut pas facilement être extrapolés à travers différents navires ou le même navire dans différents types de 5 animaux. Par conséquent, les essais biologiques distincts doivent être élaborés et validés à tout moment ces aspects sont modifiés. Récemment, plusieurs tests biologiques ont été développés avec ces technologies pour une utilisation chez les bovins veine latérale de la saphène et de l'artère et la veine ruminale droite 6,7.
Ce dosage biologique a été développé pour étudier spécifiquement les effets que les alcaloïdes de l'ergot de support présentent sur le système vasculaire de l'intestin grêle. Il a été rapporté que 50-60% d'alcaloïdes nourris apparaissent dans le contenu de la caillette, mais seulement 5% sont récupérés dans les fèces 8. Strickland et al. 9 a déclaré dans une revue de alcaloïdes de l'ergot, qui sugg de données disponiblesis que l'intestin grêle peut être le site le plus important pour l'absorption de ergopeptine. Eckert et al. 10 aspects biopharmaceutiques Avis alcaloïdes de l'ergot et a déclaré qu'une fois qu'ils traversent la barrière épithéliale, les alcaloïdes de l'ergot de seigle sont transportés soit par le système lymphatique de la veine sous-clavière ou via la veine mésentérique et dans le sang portail. Rhodes et al. 11 fait état d'une diminution du débit sanguin vers le duodénum et du côlon chez les bouvillons consommant une (haute alcaloïde de l'ergot de seigle) alimentation riche en endophytes infectés. Utilisation de l'artère et la veine essai biologique ruminale droite, Foote et al. 12 ont démontré que les alcaloïdes de l'ergot de seigle sont vaso-actif dans le système vasculaire du rumen. Foote et al. Ensuite 13 ont démontré que l'exposition in vivo du rumen à alcaloïdes de l'ergot se traduit par un flux sanguin diminué épithéliale de rumen. Cette diminution du débit sanguin vers la surface d'absorption du rumen a provoqué une réduction concomitante en nutriments (acides gras volatils) flux. Compte tenu de la quantité de alcaloïdes de l'ergot de passage à l'intestin grêle de l'intestin antérieur; il a été émis l'hypothèse que le même effet sur le système vasculaire intestinal petit et l'absorption des nutriments pourrait se produire. Cela a nécessité le développement de l'artère mésentérique et la veine essai biologique de l'iléon proximal bovine.
Protocol
Representative Results
Discussion
Le premier défi dans le développement de cet essai biologique a été la création d'un site de collecte reproductible à la vascularisation mésentérique. L'uniformité du site d'échantillon est critique, car une partie des fonctions de la faible variation de l'intestin au cours de la progression à travers le jéjunum de l'iléon et du mésentère varient donc dans le même modèle. Les branches de l'iléon de artère mésentérique et la veine sont les plus faciles à identifier grâce à …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs reconnaissent Ryan Chaplin et le Dr Gregg Rentfrow de l'Université du Kentucky Viandes Lab et le ministère des animaux et des sciences alimentaires de fournir des occasions de recueillir des tissus expérimentales utilisées ici.
Materials
| Name of the Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comment/Description (optional) |
| Multi Myograph | Danish Myo Technologies | 610M | A myograph is critical to this bioassay, but there are other platforms available for use that will suffice. |
| Powerlab 8/sp | ADIntruments | ML785 | |
| LabChart 7 | ADInstruments | Version 7 | |
| Force Calibration Kit | Danish Myo Technologies | 100055 | Specific to DMT myographs |
| Bottle-top Filter | Nalgene | 595-4520 | 0.22 um pore size; 45 mm neck size |
| #5 Jewler’s Forceps | Miltex | 555008FT | Any brand of forceps can be used |
| Noyes Iris Scissors | Miltex | 18-1510 | Any brand of scissors can be used |
| Dissecting Scope | Zeiss | Stemi 2000-C | Any brand of dissecting light microscope will suffice |
| Adjustable Tissue Matrice | Braintree Scientific | TM C12 | This is not critical to the assay, but greatly reduces section to section variation in length and speeds up the slicing process greatly |
| Krebs-Hensleit Buffer | Sigma-Aldrich | K3753-10x1L | It is not necessary to buy Krebs, this can be made in house |
| Calcium chloride dehydrate | Sigma-Aldrich | C7902-500G | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761-500G | |
| Desipramine-HCl | Sigma-Aldrich | D3900-5G | |
| Propranolol-HCl | Sigma-Aldrich | P0884-1G | |
| KCl | Sigma-Aldrich | P9333-500G | |
| 95% O2/5% CO2 | Scott Gross | UN3156 |
Referências
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