Остеокласты основной клеток костного резорбции в организме. Возможность изолировать остеокластов в больших количествах привело к значительному прогрессу в понимании остеокластов биологии. В этом протоколе, мы опишем метод для изоляции, культивирования и количественного активность остеокластов в пробирке.
Остеокласты высоко специализированные клетки, которые являются производными от моноцитов / макрофагов костного мозга. Их уникальная способность поглощать как органические, так и неорганические матрицы кости означает, что они играют ключевую роль в регуляции скелетных ремоделирования. Вместе остеобласты и остеокласты отвечают за динамического процесса связи в который вовлечены и резорбции кости и образование костной ткани, действующее вместе для поддержания нормального скелета во время здоровья и болезни.
В качестве основного клетки костной резорбции в организме, изменение остеокластов дифференциации или функции может привести к глубоким эффектов в организме. Заболевания, связанные с измененной функции остеокластов может изменяться в тяжести от смертельной заболевания у новорожденных из-за отказа сформировать пространство мозга для кроветворения, чтобы чаще наблюдается патологий, таких как остеопороз, в котором чрезмерное остеокластов резорбции кости предрасполагает к разрушению образования.
ЛОР "> Возможность изолировать остеокластов в больших количествах в лабораторных позволило добиться значительных успехов в понимании цикла костного ремоделирования и проложил путь для открытия новых терапевтических стратегий, борьбе с этими заболеваниями.Здесь мы опишем протокол для изоляции и культивировать остеокластов из костного мозга мыши, который будет давать большое число остеокластов.
Костного ремоделирования является динамичным и включает муфту формирования костей с костной резорбции 1. Это жестко регулируется процесс отвечает за поддержание скелет в нормальном гомеостаза, и в ответ на повреждение и болезни.
Остеокласты уникальны, многоядерные клетки, которые способны к резорбции как органические, так и неорганические матрицы кости. Остеокласты выводятся из моноцитов / макрофагов костного мозга 2-5. Отклонения в функции или образованием остеокластов может привести в различных клинических патологий, в том числе общих заболеваний, как остеопороз.
Способность генерировать остеокластов в пробирке позволило значительному прогрессу в нашем понимании кости биологии 6. В результате, новые терапевтические агенты для лечения возникающих остеокластов, связанные с заболеваниями, которые ответственны за значительных заболеваний и смертности 7 </sдо>. Гомеостатическое поддержание костной массы и силы требует согласованных действий формирования костной остеобластов и костей резорбции остеокластов 8,9. Гомеостаза кости изменяется в ряде заболеваний, в том числе постклимактерического остеопороза, в которой увеличена активность остеокластов приводит к патогенным потери костной массы и плотности 10. С увеличением доступности трансгенных мышиных моделях заболеваний человека, есть еще возможность расшифровать роль остеокластов в человеческой болезни костей 11-13.
Многочисленные протоколы методов остеокластов культивирования появляются в литературе, с много вариантов описано 9,12,14. Син и его коллеги описывают аналогичную методику с протоколом, описанным ниже, в их описании osteoclastogenic анализов из мышиных клеток костного мозга. Тем не менее, чтобы освободить клетки костного мозга следующие урожая длинных костей, Син и др. Промывать полость костного мозга с α-MEM полной среде14. Catalfamo исследован эффект гипергликемии на функцию остеокластов и описывает способ, в котором все клетки мобилизовали путем промывки костного мозга культивировали в течение 24 ч, после чего неадгезивные клетки отбрасывали 12, техника также используется Бойл и др . 9 Эти ранее опубликованные протоколы требуют практику промывки костный мозг, утомительной практики, которая также вводит риск травмы иглой и потере ценного костного мозга, как надо отрезать оба конца кости. Протокол, который мы описываем, реализует использование в ступке с пестиком, чтобы изолировать остеокласты, который подобен способу, описанному макрофагов изоляции по Weischenfeldt и др. 15
Наш опыт, однако, является то, что изоляция остеокластов и в культуре пробирке, используя ранее опубликованные методы результаты в переменных результатов с точки зрения производства остеокластов, что часто приводитв неспособности развивать остеокластов. Таким образом, мы разработали протокол, который позволяет для последовательного выделения из костного мозга мыши, чтобы получить большое количество многоядерных остеокластов в пробирке, с приблизительной выходом 70-80% клеток, первоначально плакированных формирования макрофаги и впоследствии остеокласты, в присутствии индукционные остеокластов СМИ.
Возможность легко изолировать и вырастить большое количество остеокластов в пробирке был ответственен за помощь для углубления понимания биологии кости и остеокластов-опосредованных заболеваний. Это было определение RANKL, что приведет к этому, когда он был недавно идентифициров?…
The authors have nothing to disclose.
Мы признаем поддержку грантов НИЗ R01 DE021683, R01 DE019434, U01 HL099776, Фонда Дуб и Hagey лаборатории детской регенеративной медицины.
Name of the Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
MEM, no glutamine, no phenol red | Gibco | 51200-038 | |
M-CSF, recombinant mouse | Gibco | PMC2044 | |
Recombinant Mouse TRANCE/RANK L/TNFSF11 (E. coli expressed) | R&D Systems | 462-TEC-010 | |
Prostaglandin E2 | Sigma-Aldrich | ||
Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 | |
Acid Phosphatase, Lekocyte (TRAP) kit | Sigma-Aldrich | 387A | |
Osteoassay bone resorption plates, 24 well plates | Corning Life Sciences | 3987 |