स्लाइस यह हॉट: शारीरिक तापमान में तीव्र वयस्क मस्तिष्क टुकड़ा करने की क्रिया
Summary
In this paper we show a method for preparing acute brain slices in physiological temperature, using a conventional physiological solution without special modifications for the cutting (such as adding sucrose) and without intracardial perfusion of the animal before slice preparation.
Abstract
यहाँ हम तीव्र मस्तिष्क के स्लाइस की तैयारी के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं. यह प्रक्रिया काफी हद तक परिणामों की गुणवत्ता निर्धारित करता है कि electrophysiological पैच दबाना प्रयोगों के लिए एक महत्वपूर्ण तत्व है. यह प्रक्रिया काटने के दौरान ठंडा कदम omitting परिपक्व जानवरों से अत्यधिक मेलिनकृत मस्तिष्क संरचना के साथ काम है, खासकर जब स्वस्थ स्लाइस और कोशिकाओं प्राप्त करने में लाभकारी है कि दिखाया गया है. ऊंचा तापमान केवल पर अनुमान लगाया जा सकता है तंत्रिका स्वास्थ्य का समर्थन करता है जिससे सटीक तंत्र, यह है कि कारण खड़ा हालांकि, जब भी संभव हो, टुकड़ा करने की क्रिया किया जाता है जिसमें तापमान तापमान संबंधित कलाकृतियों को रोकने के लिए शारीरिक स्थितियों के करीब होना चाहिए. इस पद्धति का एक अन्य महत्वपूर्ण लाभ प्रक्रिया की सादगी और इसलिए कम तैयारी समय है. प्रदर्शन विधि में वयस्क चूहों का इस्तेमाल किया जाता है, लेकिन एक ही प्रक्रिया युवा चूहों के साथ ही चूहों के साथ लागू किया जा सकता है. इसके अलावा, निम्न पैच सीएलamp के प्रयोग क्षैतिज अनुमस्तिष्क स्लाइस पर किया जाता है, लेकिन एक ही प्रक्रिया भी अन्य विमानों के साथ-साथ मस्तिष्क की अन्य पीछे क्षेत्रों में इस्तेमाल किया जा सकता है.
Introduction
प्रस्तुत विधि का उद्देश्य विशेष रूप से वयस्क या यहां तक कि पुराने पशुओं का उपयोग करते समय, इन विट्रो electrophysiological प्रयोगों के लिए उच्च गुणवत्ता वाले तीव्र मस्तिष्क के स्लाइस को मिल रहा है.
दो सुंदर वाक्य में Skrede और Westgaard 1 द्वारा वर्णित के रूप में तीव्र मस्तिष्क टुकड़ा करने की क्रिया विधि, आधुनिक तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान की नींव में से एक बन गया है और दुनिया भर में असंख्य रूपों में कार्यरत है. स्लाइस की गुणवत्ता टुकड़ा प्रति न्यूरॉन्स रहने वाले की संख्या में परिलक्षित होता है, समय की अवधि के दौरान जो कोशिकाओं ऊतक की अखंडता में और साथ ही उनके electrophysiological और रूपात्मक गुण रहते हैं. इसके अलावा, स्थिर रिकॉर्डिंग के लिए अधिक से अधिक अवधि स्लाइस की गुणवत्ता पर निर्भर करता है. इस प्रकार, दशकों के साथ, मूल टुकड़ा करने की क्रिया विधि आगे काटने की रचना की जटिल संशोधनों द्वारा अक्सर 2-10, काटने के बाद टुकड़ा वसूली बढ़ाने के लिए अलग-अलग अनुसंधान समूह द्वारा विकसित ओ किया गया हैसाथ ही साथ ठंडा शारीरिक समाधान के साथ पशु का इंट्रा-हृदय पूर्व छिड़काव (जैसे एस्कॉर्बेट, Thiourea या यहां तक कि एच 2 ओ 2 जोड़ने के रूप में) आर वसूली समाधान.
हाल ही में 11 दिखाया गया है, टुकड़ा करने की क्रिया के दौरान शारीरिक तापमान न्यूरोनल स्वास्थ्य के लिए ठंडा करने से ज्यादा फायदेमंद हो रहा है; वयस्क (2-8 महीने) कृन्तकों के साथ काम कर जब सुधार सबसे हड़ताली है. नाटकीय तापमान परिवर्तन से बचाव के कारण इस तरह के plasticity के 13 और आयन चैनल कैनेटीक्स 13,14 के रूप में कोशिकाओं में तापमान पर निर्भर प्रक्रियाओं, कलाकृतियों को रोकता है. इस तरह के बदलाव झिल्ली वोल्टेज और intracellular कैल्शियम संकेतन, कील दहलीज को प्रभावित है, और आकार स्पाइक सकता है.
यहाँ प्रस्तुत 'हॉट' तीव्र टुकड़ा तैयारी विधि, किसी भी मस्तिष्क क्षेत्र से उच्च गुणवत्ता वाले तीव्र मस्तिष्क के स्लाइस प्राप्त सेरिबैलम, कॉर्टेक्स और हिप्पोकैम्पस, brainstem 16 नाभिक सहित के लिए एक सामान्य प्रक्रिया है </ समर्थन> के रूप में अच्छी तरह से घ्राण बल्ब के रूप में, दोनों चूहों और चूहों में.
विशेष रूप से, शारीरिक तापमान टुकड़ा करने की क्रिया प्रक्रिया काटने ब्लेड लगभग पूरी तरह से क्षैतिज vibrates और किसी भी संरचनात्मक दोषों के बिना है कि आवश्यकता है. इस तरह की परिशुद्धता पुराने स्लाइसर मॉडलों के साथ प्राप्य नहीं हो सकता है; कम तापमान चयापचय aberrations की कीमत पर, भले ही यांत्रिक क्षति के लिए ऊतक अधिक प्रतिरोधी बनाने के लिए लगता है के रूप में इस तरह के मामलों में, हम ठंड ठंड की स्थिति में टुकड़ा तैयारी प्रदर्शन की सलाह देते हैं.
Protocol
Representative Results
Discussion
हम शारीरिक के बजाय ठंडा तापमान में चूहों से तीव्र मस्तिष्क के स्लाइस की तैयारी के लिए एक विधि प्रदर्शित करता है.
यह ठंड शर्तों के साथ तैयार उन लोगों के साथ तुलना में जब गर्म परिस्थितियों में ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We would like to acknowledge the significant contribution Dr. Shiwei Huang (Australian National University) in validating the method. Furthermore, we would like to thank Ms. Kasia Pietrajtis for helpful comments regarding Golgi cells and Mr. Vitaly Lerner for the cortex experimental data. This work was supported by PITN-GA-2009-238686 (CEREBNET), FP7-ICT (REALNET), ELSC and ISF.
Materials
| Name | Company | Catalog # | Comments |
| Pentobarbital | CTS | 170066 | Concentration: 60 mg / ml in physiological saline. |
| Big scissors | FST | 14001-16 | Any large scissors or a guillotine with sufficiently sharp edges can be used for decapitation |
| Iris scissors | Prestige medical | 48,148 | Any fine tip scissors can be used, provided the scissor blades are not longer than 1.5 – 2 cm |
| Fine tip forceps | FST | 11254-20 | |
| Scalpel | FST | 91003-12 | |
| Scalpel blade #11 | FST | 10011-00 | |
| Small spatula | Fisher | 2350 | |
| Filter paper | Any laboratory brand can be used. | ||
| Petri dishes | Duroplan | Z231509-1 | |
| Glass beakers | SCHOT | 10022846 | |
| Pasteur pipette | Maple Leaf Brand | 14672-029 | |
| Super glue | LOCTITE | 4091361/1 | |
| Slicer | Campden | 7000-smz | |
| Ceramic slicing blade | Campden | 7550-1-C | |
| Magnetic heater/stirrer | For heating up the SPS for the procedure | ||
| Electric kettle | For heating up water for temperature control | ||
| Slice recovery chamber + heating unit | Warner instruments | BSC-HT + BSC-BUW | Home-built models may also be used. |
| Thermometer | For monitoring SPS temperature during dissection and slicing |
Referências
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