Procedimiento para safena humana Venas<em> Ex Vivo</em> Perfusión y refuerzo externo
Summary
Los mecanismos que conducen al desarrollo de hiperplasia de la íntima (IH) y la insuficiencia injerto de vena son aún poco conocidos. Este estudio describe un sistema ex vivo para perfundir venas humanos bajo flujo y presión controladas. Además, la eficiencia de refuerzo de malla externa para limitar el desarrollo de la IH se evaluó.
Abstract
El apoyo principal de las terapias contemporáneas para la enfermedad arterial oclusiva extensa es puente venoso. Sin embargo, su durabilidad se ve amenazada por la hiperplasia de la íntima (IH) que a la larga conduce a la oclusión del vaso y el fracaso del injerto. Las fuerzas mecánicas, esfuerzo de corte particularmente baja y alta tensión de la pared, se cree que para iniciar y sostener estos cambios celulares y moleculares, pero su contribución exacta aún no se ha desenredado. Para evaluar selectivamente el papel de la presión y la tensión de corte sobre la biología de IH, un sistema de perfusión ex vivo (EVPS) fue creado para perfundir segmentos de venas safena humanos bajo el régimen arterial (tensión alta cizalladura y alta presión). Otras innovaciones técnicas permitieron la perfusión simultánea de dos segmentos de la misma línea, uno reforzado con una malla externa. Las venas se recogieron usando una técnica de no tocar y transferidas inmediatamente al laboratorio para su montaje en el EVPS. Un segmento del aislador del reciénvena ATED no fue perfundido (control, día 0). Los otros dos segmentos fueron perfundidos durante un máximo de 7 días, uno está completamente cubierta con una malla externa 4 mm (diámetro). La presión, velocidad de flujo, y el pulso fueron controlados y ajustados para imitar las condiciones hemodinámicas que prevalecen en la arteria femoral de forma continua. Al término de la perfusión, las venas se desmontaron y se usaron para análisis histológico y molecular. En condiciones ex vivo, la perfusión de alta presión (arterial, = 100 mm Hg media) es suficiente para generar IH y remodelación de las venas humanas. Estas alteraciones se reducen en la presencia de una malla de poliéster externa.
Introduction
Las enfermedades cardiovasculares son la principal causa de morbilidad y mortalidad en los países occidentales 1. A pesar de los avances en los tratamientos endovasculares, cirugía de bypass sigue siendo el pilar de las terapias actuales, por lo tanto más de medio millón de injertos de vena se realizan anualmente en los Estados Unidos. Sin embargo, a pesar de décadas de investigación, el 30-60% de los injertos de vena de la extremidad inferior fracasan en los primeros años, debido a la hiperplasia de la íntima (IH) 2. Las fuerzas mecánicas, estrés particularmente baja cizalladura (SS) y la tensión alta de la pared, son clave en el inicio y desarrollo de esta respuesta hiperplásica 3,4. Para abordar esta cuestión, un sistema de perfusión in vivo venas ex (EVPS) se generó a estudiar, en condiciones estrictamente controladas hemodinámicas (presión y el estrés de cizalla), el comportamiento de las venas safena humanos. En este estudio, después de la inserción en la circulación arterial-como, de alta presión (media = 100 mm Hg) era suficiente para estimular la proliferación y la migración de células musculares lisas en la capa intimal (IH) 5.
Estudios de mamíferos han sugerido el uso de refuerzo externo como un método eficiente para apoyar la "vena arterializada" y contrarrestar la hemodinámica aguda cambia la vena se enfrenta una vez implantado en un entorno arterial. La malla impedido el exceso de distensión, aumento de la tensión de cizallamiento, y redujo tensión de la pared y, en consecuencia IH 6-10. Sin embargo, los mecanismos subyacentes y su aplicabilidad a las venas humanas en la mejora de la permeabilidad de derivación no se han caracterizado completamente. Nuestros EVPS se utilizó para comparar, en condiciones que imitan las alteraciones de una vena caras Una vez insertado en un régimen arterial (estrés de alto cizallamiento y presión), el comportamiento de las venas safenas humanos en la ausencia y presencia de una malla tubular de poliéster macroporoso externo. Al prevenir la remodelación patológica y IH, la malla proporciona evidencia de su potencial eficacia clínica 11 </sup>.
Este estudio 1) presenta un modelo ex vivo de las venas safena humanos perfusión bajo presión controlada y tensión de corte 2) demuestra que la malla de poliéster-macro porosa externa reduce IH y proporciona información crucial para su potencial aplicación clínica.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este estudio revela un vivo sistema de perfusión venosa ex (EVPS) para llevar a cabo extensos estudios hemodinámicos en las venas humanas. Este sistema permite que las venas safenas de perfusión bajo parámetros hemodinámicos definidos en la ausencia de factores de crecimiento y agravantes inflamatorias liberadas por las células circulantes in vivo. Por lo tanto, proporciona una mejor comprensión de las vías subyacentes implicados en el control de IH en venas humanos injertos 5,11,…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por becas de la SNF [31003A-138528], la Octav y la Fundación Marcella Botnar, la Fundación Novartis y la Fundación Emma Muschamp. Agradecemos a Martine Lambelet, y Jean-Christophe Stehle por su excelente asistencia técnica.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI 1640 – Glutamax | Life Technologies | 61870-010 | |
| Penicilline/Streptomycine/Fungizone | Bioconcept | 4-02F00-H | |
| Dextran from Leuconostoc spp. 500 gr. | Sigma-Aldrich | 31390 | |
| Tampon PBS CHUV pH 7.1-7.3 1 lt. | Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG | 100 0 324 00 | |
| Cryosectionning embedding medium – Tissue-Tek OCT Compound | Fisher Scientific | 14-373-65 | |
| Silicon Tubing (Peroxide) L/S 16 (96400-16 ) – 7.5m | Idex Health & Science GMBH | MF0037ST | |
| Y-splitter | Idex Health & Science GMBH | Y-connector | |
| 35 mm Culture dish | Sigma-Aldrich | CLS430165-100EA | |
| 15 ml Falcon tube | BD Bioscence | 352096 | |
| 50 ml Falcon tube | BD Bioscence | 352098 | |
| Gearing pump – Reglo-Z | Idex Health & Science GMBH | SM 895 | App-Nr 03736-00194 |
| Pump Head | Idex Health & Science GMBH | MI0008 | |
| Monitoring Kit TRANSPAC IV | icumedical | 011-0J736-01 | |
| 20 mL Syringes | B. Braun Medical SA | 4612041-02 | |
| Etibon 3-0 FS-2 | Ethicon- Johnson&Johnson | EH7346H | |
| Mesh ProVena 6-8mm | B. Braun Medical SA | 1105012-14 | |
| NaCl: Sodium Chlorure Solution perfusion 0.9% (100 ml) | B. Braun Medical SA | 534534 | |
| Masterflex L/S Standard Drive | Cole-Parmer Instrument Co | 7521-10 | |
| Acquisition card | National Instruments | PCI-6024 E | |
| Flowmeter module | Transonic Systems Inc. | TS410 and T402 | |
| Stopcock with 3-ways | BD Connexta Luerlock | 394600 | |
| Millex Filter | Milian | SE2M229I04 |
Referências
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