Medindo alimentação resposta induzida por glutationa em Hydra

Resumo

Aqui descrevemos um ensaio simples para a quantificação da resposta alimentar em hidra induzida pela forma reduzida de glutationa. Este ensaio baseia-se na medição da distância entre a extremidade apical do tentáculo e a boca da hidra.

Resumo

Hydra está entre os organismos mais primitivos que possuem um sistema nervoso e quimiossensação para detectar glutationa reduzida (GSH) para capturar a presa. O movimento dos organismos presas causa descarga mecanossensorial das células urticantes chamadas nematocistos da hidra, que são inseridas na presa. A resposta alimentar na hidra, que inclui o enrolamento dos tentáculos para trazer a presa em direção à boca, abertura da boca e consequente engolfamento da presa, é desencadeada pelo GSH presente no fluido liberado da presa ferida. Para poder identificar o mecanismo molecular da resposta alimentar em hidra que é desconhecido até o momento, é necessário estabelecer um ensaio para medir a resposta alimentar. Aqui, descrevemos um método simples para a quantificação da resposta alimentar no qual a distância entre a extremidade apical do tentáculo e a boca da hidra é medida e a razão dessa distância antes e depois da adição de GSH é determinada. Descobriu-se que a proporção, chamada de propagação relativa dos tentáculos, fornece uma medida da resposta alimentar. Este ensaio foi validado usando um modelo de fome no qual a hidra faminta mostra uma resposta alimentar aprimorada em comparação com a hidra alimentada diariamente.

Introdução

Hydra é o organismo mais primitivo que possui um sistema nervoso e quimiossensação para detectar glutationa reduzida (GSH) para capturar a presa¹. Alimenta-se de uma variedade de animais, como nematóides, crustáceos, larvas de insetos, girinos e peixes recém-nascidos¹. O movimento desses organismos de presa causa descarga mecanossensorial das cápsulas urticantes chamadas nematocistos da hidra, que são inseridas na presa². O GSH presente no fluido liberado da presa ferida subsequentemente ativa a resposta alimentar na hidra, que inclui o enrolamento dos tentáculos para trazer a presa em direção à boca, abertura da boca e consequente eng....

Protocolo

1. Hydra Cultura e medição da resposta Alimentação

1. Manter pólipos hidra em cultura, alimentando-os com diária de artemia e mantendo-os num meio (tampão de 1 mM Tris-HCl, pH 7,6, NaCl a 1 mM, CaCl2 1 _mM, KCl 0,1 mM, e 0,1 mM de _MgSO4) contida em um tigela de vidro a 18 ° C sob ciclos escuros hr de luz 12 12 h, como descrito anteriormente ^12.
2. Para a medição da resposta de alimentação, transferir um pólipo amadurecer hidra tendo 5 a 6 tentáculos para um único poço de uma placa de 24 poços. Retirar o meio residual do bem, inclinando-lo, e em seguida, adicione imediatamente 500 mL de meio fresco.
3. Preparar a s....

Resultados

A glutationa faz com que a hidra exibem ondulação dos tentáculos para a boca com a finalidade de engolindo a presa. Essa ondulação de tentáculos traz extremidades apicais dos tentáculos mais perto do hypostome. Isto resulta na redução da propagação tentáculo, ou a distância linear entre a extremidade apical do tentáculo e hipostoma (Figura 1). A propagação tentáculo parente, ou a proporção de tentáculo média espalhar antes e após a adição de glutationa, em média em vários pólipos reduz ao longo do tempo.......

Discussão

Comportamento alimentar em hidra representa um dos sistemas de quimio mais ancestrais dos metazoários. Embora a presença de GSH no fluido crustáceo libertado após assistida-nematocyst captura de presa foi detectada há muito tempo ^1, nem a proteína GSHR nem o gene que codifica putativo / s têm sido caracterizadas a partir da hidra até à data. Poucas tentativas têm sido feitas para caracterizar as proteínas de ligação a GSH na hidra ^{8, 14, 15.} No entanto, a identidade destas proteínas receptoras puta.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Incubadora Refrigerada	Panasonic	Microscópio MIR-254-PE
	Leica	S8AP0
Câmera para microscópio	Leica	EC3
Glutationa reduzida	Sigma	G4251	Armazenado a 4 °C. Leve o frasco à temperatura ambiente antes de abrir para evitar oxidação
Programa de edição de imagem	GIMP	Versão 2.8