Modelagem da mucosa candidíase em larval Zebrafish por swimbladder Injection

Remi L. Gratacap; Audrey C. Bergeron; Robert T. Wheeler

doi:10.3791/52182

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Artigo de método

Modelagem da mucosa candidíase em larval Zebrafish por swimbladder Injection

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DOI:

10.3791/52182

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27 de novembro de 2014

Remi L. Gratacap¹ , Audrey C. Bergeron¹ , Robert T. Wheeler¹^,²

¹Department of Molecular and Biomedical Sciences, University of Maine, ²Graduate School of Biomedical Sciences and Engineering, University of Maine

Neste artigo

Resumo

In vivo interações espaço-temporais de patógenos e defesas imunes no nível da mucosa não são facilmente visualizadas em hospedeiros vertebrados existentes. O método aqui apresentado descreve uma plataforma versátil para estudar a candidíase mucosa em vertebrados vivos usando a bexiga natatória do peixe-zebra juvenil como local de infecção.

Resumo

Defesa precoce contra patógenos da mucosa consiste de uma barreira epitelial e células imunitárias inatas. A imunocompetência de ambos, e sua intercomunicação, são de extrema importância para a proteção contra infecções. As interações de células imunitárias inatas epiteliais e com um patógeno são melhor investigada in vivo, onde o comportamento complexo se desenrola ao longo do tempo e do espaço. No entanto, os modelos existentes não permitem fácil imaging espaço-temporal da batalha com patógenos ao nível da mucosa.

O modelo desenvolvido aqui cria uma infecção das mucosas por injecção directa do agente patogénico fúngico, Candida albicans, em swimbladder de peixe-zebra juvenil. A infecção resultante permite imagens de alta resolução do comportamento das células epiteliais e imune inata ao longo do desenvolvimento da doença mucosa. A versatilidade deste método permite interrogatório do hospedeiro para sondar a seqüência detalhada de eventos imunológicos que levam a phrecrutamento agocyte e examinar os papéis de determinados tipos de células e vias moleculares na proteção. Além disso, o comportamento do agente patogénico como uma função do ataque do sistema imunológico pode ser iluminados simultaneamente por fluorescência utilizando-expressando proteína C. albicans. O aumento da resolução espacial da interação patógeno-hospedeiro também é possível através da técnica de dissecção da bexiga natatória rápida descrito.

O modelo de infecção da mucosa descrito aqui é simples e altamente reprodutível, tornando-se uma ferramenta valiosa para o estudo da mucosa candidíase. Este sistema pode também ser amplamente traduzível a outros agentes patogénicos das mucosas, tais como micróbios micobacterianas, bacterianas ou virais que normalmente infectam através de superfícies epiteliais.

Introdução

As infecções da mucosa podem levar a infecções da corrente sanguínea com risco de vida devido ao dano da barreira epitelial, que permite o acesso dos patógenos ao ambiente sistêmico^1,2. Além disso, as infecções da mucosa também podem causar imunopatologia significativa, mesmo quando contidas externamente^3-5. O fungo unicelular comensal Candida albicans está presente na maioria da população na cavidade oral e em outros locais da mucosa^6-9. Embora normalmente contidos por respostas imunes inatas e adaptativas, defeitos imunes inatos e intervenções médicas podem levar a candidíase mucosa grave. O ataque à barreira epitelial resul....