A injeção direta no nervo óptico do rato é útil para a pesquisa regenerativa. Demonstramos uma técnica minimamente invasiva para injeção direta em um nervo óptico de rato que não envolve a abertura do crânio. Usando este método, as complicações cirúrgicas são minimizadas e a recuperação é mais rápida.
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Artigo de método
Técnica minimamente invasiva para a injeção em Rat Optic Nerve
Neste artigo
Resumo
Resumo
O nervo óptico do rato é um modelo útil para a pesquisa de regeneração de células-tronco. A injeção direta no nervo óptico do rato permite a entrega ao sistema nervoso central em uma cirurgia minimamente invasiva sem remoção óssea. Esta técnica descreve uma abordagem para visualização e injeção direta do nervo óptico após uma pequena dissecção fascial da crista orbital, usando uma sutura de tração conjuntival para puxar suavemente o olho para baixo e para fora. Exemplos representativos de um nervo óptico injetado mostram injeção bem-sucedida de contas tingidas.
Introdução
O nervo óptico oferece uma localização ideal para o sistema nervoso central (SNC) de pesquisa regenerativa incluindo condições oftalmológicas como a neurite óptica, glaucoma e trauma. As injecções de uma variedade de células estaminais quer demonstraram eficácia ou mostraram-se promissores na substituição de mielina perdido, aumentando a contagem axonal e / ou prevenção de doenças degenerativas. 1,2
O nervo óptico humano contém aproximadamente 1,2 milhões de axónios que viajam paralelas da retina para o quiasma com um diâmetro de cerca de 3,0-3,5 mm. 3 Para modelar doenças humanas em laboratório, o rato tem sido util....
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Protocolo
NOTA: Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Comitê Animal Care e Use o Johns Hopkins. Aparelhos de anestesia exigir uma inspecção anual e calibração, se necessário.
1. Anestesia e Posicionamento
- Anestesia.
- Execute todos os procedimentos cirúrgicos sob anestesia com isofluorano 2-3%. Confirme nível adequado de anestesia por pitada dedo do pé e taxa de respiração. Verifique se o rato não se mexe em resposta a uma pitada dedo do pé.
NOTA: Um vacilo indica anestesia que é tarde demais e pode exigir anestesia mais longos antes de iniciar ou uma concentração de isofluorano superior. A taxa de respiração inferior a 1 resp....
- Execute todos os procedimentos cirúrgicos sob anestesia com isofluorano 2-3%. Confirme nível adequado de anestesia por pitada dedo do pé e taxa de respiração. Verifique se o rato não se mexe em resposta a uma pitada dedo do pé.
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Resultados
Na conclusão da experiência, os ratos foram sacrificados e perfundidos com paraformaldeído a 4%. Os nervos ópticos foram cuidadosamente dissecados e montados para seccionamento criostático. A Figura 2 mostra um exemplo de um nervo óptico de rato inteiro com baixa potência, em que o corante azul de Evans foi injectada a fim de visualizar o local. A seta identifica a localização precisa da injecção. Esta dissecção foi realizada dentro de alguns minutos da injecção, tal como indicado pela difusão restrita .......
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Discussão
A injeção direta no nervo óptico de células-tronco ou outros produtos destinados a facilitar a regeneração fornece um modelo conveniente em comparação com outros meios de injeções no SNC. Essa técnica leva menos tempo, requer menos anestesia total, evita perfurar ou remover tecido craniano ou ósseo, reduz as taxas de complicações e permite uma recuperação mais rápida após a cirurgia.
As etapas mais críticas neste protocolo incluem: 1. Hemostasia adequada no campo cirúrgico para permitir uma v.......
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Divulgações
Os autores não têm divulgações significativas para relatar.
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado pela NeuralStem, Inc. e pelo Johns Hopkins Project RESTORE.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Rato Lewis | Charles River | 4 | Qualquer cepa de rato funcionará. |
| Máquina de anestesia | Surgivet | CDS9000 | CDS 9000 Máquina de anestesia para pequenos animais - Bomba de infusão de montagem em poste |
| Stoelting | 53129 | ||
| Microscópio de dissecção | National Optical | 409-411-1105 | |
| Fonte de luz de fibra óptica | Fisher Scientific | 12-562-21 | |
| Dissecção e Armazenamento de Instrumentos Estereotáxicos | 51400 | ||
| Extrator de pipetas | Kopf | 750 | |
| Pipetas | World Precision Instruments | 18150-6 | |
| Lâminas de bisturi descartáveis | Harvard Apparatus | 810-15-021 | |
| Tesoura de iridectomia | Ciências de Microscopia Eletrônica | Uniband LA-4XF |
Referências
- Dahlmann-Noor, A., Vijay, S., Jayaram, H., Limb, A., Khaw, P. T. Current approaches and future prospects for stem cell rescue and regeneration of the retina and optic nerve. Canadian journal of ophthalmology Journal canadien d'ophtalmologie. 45 (4), 333-341 (2010).
- Quigley, H. A., Iglesia, D. S.
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Reimpressões e permissões
