כינונה מחדש של חלבון טראנסממברנלי, יון ערוץ מתח מגודרת, KvAP, לענק Unilamellar שלפוחית למיקרוסקופי וצמד תיקון ללימודים
Summary
הכינון מחדש של החלבון הטרנסממברני, KvAP, לתוך שלפוחית unilamellar ענקית (GUVs) הוא הוכיח לשתי שיטות התייבשות-החזרת נוזלים – electroformation, ונפיחות בסיוע ג '. בשני השיטות, שלפוחית unilamellar קטנה המכילה החלבון הם התמזגו יחד כדי ליצור GUVs כי אז יכול להיות שנחקר על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי ואלקטרופיזיולוגיה תיקון מהדק.
Abstract
הענק Unilamellar שלפוחית (GUVs) היא מערכת פופולרית biomimetic לחקר התופעות הקשורות קרום. עם זאת, נפוץ פרוטוקולים לגדול GUVs חייב להיות שונה כדי ליצור GUVs המכיל חלבונים הטרנסממברני פונקציונליים. מאמר זה מתאר שתי שיטות התייבשות-החזרת נוזלים – electroformation ונפיחות בסיוע ג '- כדי ליצור GUVs המכיל אשלגן ערוץ המתח מגודרת, KvAP. בשתי השיטות, פתרון של שלפוחית unilamellar קטנה המכיל חלבון מיובש באופן חלקי כדי ליצור ערימה של ממברנות, אשר לאחר מכן מותרת להתנפח בחיץ להחזרת נוזלים. לשיטת electroformation, הסרט מופקד על אלקטרודות פלטינה, כך ששדה AC יכול להיות מיושם בהחזרת נוזלי סרט. בניגוד לכך, שיטת הנפיחות בסיוע ג 'משתמשת במצע ג'ל agarose כדי לשפר את התייבשות סרט. שני שיטות יכולות לייצר GUVs ב( למשל, 100 מ"מ) ריכוזי מלח נמוכים (למשל, 5 מ"מ) ופיסיולוגיים. GUVs וכתוצאה מכך מאופיין באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, והפונקציה של ערוצים מחדש נמדדה באמצעות תצורת תיקון מהדק מבפנים החוצה. בעוד נפיחות בנוכחות שדה חשמלי משתנה חשמלי (electroformation) נותנת תשואה גבוהה של GUVs ללא פגם, שיטת הנפיחות בסיוע ג 'מייצרת הפצת חלבון הומוגנית יותר ולא דורשת ציוד מיוחד.
Introduction
כאשר לומדים את העקרונות הפיסיקליים ששולטים במערכות חיים, גישות מלמטה למעלה תאפשר לשלוט בניסויי הרכב מערכת ופרמטרים נוספים שאינם מניפולציות בקלות במערכות מבוססות תאים 1. לתהליכים מבוססי קרום, Giant Unilamellar שלפוחית (GUVs, קוטר ~ 1-100 מיקרומטר) הוכיחו להיות מערכת biomimetic מאוד שימושית 2-7 כפי שהם מתאימים לבחינה מיקרוסקופית ומיקרומניפולציה 8-10. אמנם יש פרוטוקולים רבים ושונים כדי לייצר GUVs, רוב מתחלקים לשתי קטגוריות – תחליב המבוסס גישות 11,12 וטכניקות המבוססות על rehydrating סרט שומנים 13-16. בשיטות המבוססת על אמולסיה, העלונים הפנימיים וחיצוניים של קרומי הבוס הם התאספו ברצף מmonolayers שומנים בממשקים מים / שמן. גישה זו היא אידיאלית עבור מתמצת חלבונים מסיסים בבGUVs, וגיבוש GUVs עם הרכב שומנים עלון א-סימטרי. עם זאת, GUVs נוצר מתחליבים יכול לשמור עקבות של ממס שמשנות את התכונות מכאניות של הקרום 17, והגישה היא לא במיוחד מתאימה היטב לכינון מחדש חלבון טרנס-קרום.
שיטות להחזרת נוזלי סרט מסתמכות על העובדה שהייבוש (התייבשות) גורם תערובות שומנים רבות כדי ליצור ערימה רבת-שבשבת של ממברנות. אם זה ערימה ממוקמת אז במגע עם חיץ המימי, קרומים בערימה יעברו תזרים בנפרד ממס כביניהם ועל פני השטח של הערימה, קרומי אדם יכולים לנתק כדי ליצור GUVs 13,18 (כמו גם גן חיות אמיתית של אובייקטי lipidic אחרים). עם זאת, גם ליצירות חיץ ושומנים בדם אופטימליות, יש בשיטה זו קלסית "נפיחות ספונטנית" תשואה נמוכה יחסית של GUVs ללא פגם. שיטה נפוצה אחת כדי להגביר את התשואה של GUVs ללא פגם היא "electroformation221 ;, שבו שדה זרם חילופין (AC) מיושם בהחזרת נוזלי סרט. בעוד המנגנון נותר הבין היטב, "electroformation" יכול לתת תשואות בוס מרהיבות (> 90% בנסיבות חיוביות) למאגרי ריכוז נמוך מלח (<5 מ"מ) 14,19, ואפילו יכול לעבוד במאגרים פיסיולוגיים (~ 100 מ"מ) באמצעות תדירות גבוהה יותר (500 הרץ לעומת 10 הרץ) שדה AC ואלקטרודות פלטינה 15. גישה חלופית כדי להגביר את התשואה של GUVs ללא פגם היא "בסיוע ג 'נפיחות", שבו פתרון השומנים מופקד על מצע ג'ל פולימרים ולא פסיבי מצעים (למשל, זכוכית, PTFE) המשמשים ב" נפיחות ספונטנית קלסית ". כאשר סרט השומנים / ג'ל התוצאה הוא rehydrated, GUVs יכול במהירות ליצור אפילו למאגרים פיסיולוגיים 16,20.
כל השיטות הללו יכולים לייצר GUVs שומנים בדם היחיד שיכול לשמש כדי לחקור תופעות קרום הקשורים כגוןאינטראקציה בין חלבונים וקרומים מסיסים. עם זאת, כדי לשלב חלבון טרנס-קרום לGUVs, יש צורך בשינויים משמעותיים כדי להבטיח כי החלבון נשאר במצב תפקודי לאורך כל הליך הכינון מחדש. בעוד פתרונות של שומנים בממסים אורגניים (למשל, כלורופורם, cyclohexane) הם אידיאליים להפקת סרטי שומנים, חלבונים טרנס-קרום הם בדרך כלל יציבים רק כאשר תחום טרנס-הקרום הידרופובי שלהם מוטבע בbilayer שומנים בדם, או מוקף בmicelle חומרי ניקוי ( לדוגמא, במהלך טיהור חלבונים). לפיכך, החומר המוצא לכינון מחדש הוא בדרך כלל קרומי ילידים, חלבון מטוהר בתמיסת ניקוי, או שלפוחית המכיל חלבון unilamellar קטנה (proteo-רכבי שטח) ו / או שלפוחית רבת-שבשבת (proteo-MLVs) שהוקמו על ידי הסרת חומר ניקוי ב נוכחות של שומנים. רוב השיטות לשלב חלבונים בממברנה אלה לGUVs נחלקות לשלוש קטגוריות.
Insertio הישירn: החלבון חוצה הממברנה התלויה בחומר הניקוי מעורבב עם שומנים בדם בלבד, GUVs מראש יצר, בלשון המעטה חומר ניקוי solubilized, וחומרי הניקוי ולאחר מכן להסיר באמצעות biobeads 21. בעוד פשוט מבחינה מושגית, שיטה זו דורשת שליטה מדויקת של ריכוז חומר הניקוי, כגבוה מדי ריכוז חומר ניקוי יכול לפזר את GUVs בעוד נמוך מדי יכול לגרום לריכוז החלבון להתפתח או מצטבר.
בוס / Proteo-SUV Fusion: חלבון בproteo-רכבי שטח בשילוב עם, שומנים רק GUVs מראש יצר והיתוך הוא הקל עם פפטידים מיוחדים fusogenic 22 או חומר ניקוי 21. בדרך כלל היקף ההיתוך מוגבל מוביל לGUVs עם צפיפות חלבון נמוכה.
התייבשות / Rehydration: סרט המכיל שומני חלבון נוצר על ידי התייבשות חלקית של proteo-SUV (או proteo-MLV) פתרון וGUVs לאחר מכן גדל כמו לסרט שומנים טהור. האתגר הברור הוא להגן על החלבון במהלך dehydrati החלקיבשלב 23, אבל השיטה שמש בהצלחה כדי לשקם חלבונים טרנס-קרום כגון Bacteriorhodopsin, סידן-ATPase, integrin וVDAC לGUVs 7,23 – 25.
מאמר זה מתאר פרוטוקולי התייבשות / התייבשות לעשות GUVs המכיל את ערוץ המתח מגודרת אשלגן, KvAP, מpernix החיידקים הקדום, Aeropyrum היפר-thermophilic. יש KvAP רמה גבוהה של הומולוגיה לערוצי אשלגן תלויים מתח אוקריוטים 26 ומבנה הגבישי ידוע 27 , מה שהופך את מודל טוב ללימוד המנגנון של gating מתח. הייצור של proteo-רכבי השטח שתואר בפירוט בעבר ואינו חלק ממדריך זה 26,28,29. חשוב לציין, proteo-רכבי שטח KvAP לא צריך להיות מיוצרים עבור כל הכנת בוס, כפי שהם יכולים להיות מאוחסנים בaliquots הקטן (למשל, 10 μl) ב -80 מעלות צלזיוס למשך פרקי זמן ארוכים (> 1 שנה). Electroformationאו נפיחות בסיוע ג 'לאחר מכן ניתן להשתמש כדי לגדול GUVs מproteo-רכבי השטח KvAP (או proteo-MLVs).
השלבים העיקריים לפרוטוקול electroformation הם באיור 1. טיפות של תמיסה של רכבי שטח המכילים החלבון מופקדות על חוטי פלטינה (שמוצגים באיור 2). התייבשות חלקית של ההשעיה SUV מובילה להיווצרות של סרט חלבון שומנים באמצעות השילוב של רכבי שטח. במהלך התייבשות, שדה AC מוחל על אלקטרודות לסייע לשכבות השומנים לdelaminate ויוצר GUVs. שדה 10 הרץ עובד היטב בעת שימוש "דל מלח" (<5 מ"מ) חיץ להחזרת נוזלים 28 וGUVs להימשך מספר שעות כדי לגדול. בניגוד לכך, מאגרים פיסיולוגיים (המכילים ~ 100 מ"מ מלח) לעבוד היטב עם מתח נמוך יותר, 500 הרץ שדה AC אך דורש ממושך (~ 12 שעות) נפיחות תקופה של 15. שיטה זו מבוססת על פרוטוקול קודם, באמצעות איטו מחליק 24, אבל משתמשת בהמשך קאמרי מותאם אישיתaining שני חוטי פלטינה כפי שמוצג באיור 2 (ראה דיון לפרטים עיצוב והצעות לפשוטים יותר, מאולתר תאים).
איור 3 ממחיש את שיטת נפיחות בסיוע ג '. הפרוטוקול עובד היטב עם מאגרים עם ריכוזי מלח פיסיולוגיים, הוא מהיר, ומייצר GUVs עם הפצת חלבון הומוגני יותר. עם זאת, התשואה של GUVs המבודד, כנראה פגם-חופשי (כלומר, קרום הבוס הוא אחידה באורך-קשקשים אופטיים ואינו מצרף כל עצמים) הוא נמוך יותר, על אף שהוא מספק מספר מספיק לתיקון מהדק וניסויים מיקרו-מניפולציה . שיטה זו מבוססת על פרוטוקול שימוש בג'ל agarose לייצר GUVs שומנים בדם רק 16 ודורש ציוד ייחודי פחות מאשר שיטת electroformation.
האפיון של GUVs עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי מתואר, כמו גם הליכים באמצעות הגדרת תיקון מהדק סטנדרטית ללמדוד את פעילות KvAP ב" מבפנים החוצה "נכרת תיקוני קרום.
GUVs המכיל חלבון גידול יכול להיות קשה יותר מGUVs שומנים בדם בלבד. בפרט, תשואת הבוס הסופית יכולה לסמוך ברגישות על איך בדיוק פתרון SUV מופקד ומיובש כדי ליצור ערימת הקרום. למישהו ללא כל ניסיון קודם עם GUVs, זה עשוי להיות מועיל לראשון לגדול GUVs שומנים בדם רק לאחר פרוטוקול קונבנציונלי 15,16 בי סרט הקרום נוצר על ידי הפקדת שומנים מממס אורגני. ברגע שהפרוטוקול הקונבנציונלי עובד היטב, בתצהיר SUV והתייבשות חלקית אז יכולים להיות שולטים באמצעות רכבי שטח שומנים בדם בלבד, שהם גם מאוד מועילים כאשר התאמת הפרוטוקול להרכב שומנים בדם חדש. כאשר GUVs לגדול באופן מהימן מרכבי שטח שומנים בדם בלבד, אז זה רק צעד קטן להפקת GUVs המכיל חלבון מproteo-רכבי שטח.
Protocol
Representative Results
Discussion
מערכות מודל Biomimetic הן כלי חשוב ללימוד התכונות והאינטראקציות של חלבונים וקרומים. בהשוואה למערכות אחרות כמו מחדש BLMs או ממברנות שומנים בדם נתמכים, בוס מערכות מספר הזדמנויות הנוכחיות כוללים שליטה ניכרת של הרכב קרום, מתח וגיאומטריה, כמו גם להיות באמת ללא שמן בסיס. עם זאת, ב…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank Susanne Fenz for discussing the possibility of reconstituting proteins by agarose swelling, Feng Ching Tsai for current measurements, and present and former members of the Bassereau group for support and assistance. The project was funded by the Agence Nationale de la Recherche (grant BLAN-0057-01), by the European Commission (NoE SoftComp), by the Université Pierre et Marie Curie (grant from the FED21, Dynamique des Systèmes Complexes). M.G. was supported by an Institut Curie International PhD Fellowship, S.A. by a fellowship from the Fondation pour la Recherche Médicale, G.E.S.T. by a Marie Curie Incoming International Fellowship from the European Commission and a grant from the Université Pierre et Marie Curie. The publication fees were covered by the Labex ‘CelTisPhyBio’ (ANR-11-LABX0038).
Materials
| Name of the Material/Equipment |
Company | Catalog Number | Comments/ Description |
| DPhPC (1,2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine) | Avanti Polar Lipids | 850356P | |
| Egg PC L-α-phosphatidylcholine (Egg, Chicken) | Avanti Polar Lipids | 840051P | |
| Egg PA L-α-phosphatidic acid (Egg, Chicken) | Avanti Polar Lipids | 840101P | |
| 18:1 (Δ9-Cis) PC (DOPC) 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine | Avanti Polar Lipids | 850375P | |
| cholesterol (ovine wool, >98%) | Avanti Polar Lipids | 700000P | |
| TRed-DHPE | Invirtogen | T-1395MP | labeled lipid |
| BPTR-Ceramide | Invirtogen | D-7540 | labeled lipid |
| Choloroform | VWR | 22711.290 | AnalaR Normapur |
| Acetone | VWR | 20066.296 | AnalaR Normapur |
| Ethanol | VWR | 20821.330 | AnalaR Normapur |
| Kimwipe | Kimtech | 7552 | |
| Hamilton syringes | Hamilton Bonaduz AG | diverse | |
| Amber vials and teflon cups | Sigma | SU860083 and SU860076 | |
| Parafilm | VWR | 291-1214 | |
| microcentrifuge tube | eppendorf | diverse | |
| Agarose | Euromex | LM3 (1670-B, Tg 25.7C, Tm 64C) | |
| Sucrose | Sigma | 84097-1kg | |
| Glucose | Sigma | G8270-1kg | |
| Trehalose | Sigma | T9531-25G | |
| KCl | Sigma | P9333-1kg | |
| Hepes | Sigma | H3375-100G | |
| TRIS | Euromex | EU0011-A | |
| Osmometer | Wescor | Vapro | |
| pH meter | Schott instruments | Lab850 | |
| Sonicator | Elmasonic | S 180 H | |
| Syringe filter 0.2µm | Sartorius steim | Minisart 16532 | |
| Function generator | TTi | TG315 | |
| Platinum wires | Goodfellow | LS413074 | 99.99+%, d=0.5mm |
| Polytetrafluoroethylene | Goodfellow | ||
| Dow Corning 'high vacuum grease' | VWR | 1597418 | |
| sealing paste | Vitrex medical A/S, Denmark | REF 140014 | Sigillum Wax |
| Cover slides 22×40 mm No1,5 | VWR | 631-0136 | |
| Cover slides 22×22 mm No1,5 | VWR | 631-0125 | |
| plasma cleaner | Harrick | PDC-32G | airplasma, setting 'high' |
| petri dishes | Falcon BD | REF 353001 | 3.5 cmx1cm |
| patch clamp amplifier | Axon instruments | Multiclamp700B | |
| DAQ Card | National Instruments | PCI-6221 | |
| Labview | National Instruments | version 8.6 | |
| Glass pipettes boro silicate OD 1mm ID 0.58mm | Harvard Apparatus | GC100-15 | |
| Electrode holder | Warner Instruments | Q45W-T10P | |
| Micromanipulator | Sutter | MP-285 | |
| pipette puller | Sutter | P-2000 | |
| Camera | ProSilica | GC1380 | |
| Zeiss microscope | Zeiss | Axiovert 135 | |
| Objective | Zeiss | 40x long working distance, Phase contrast | |
| Objective | Zeiss | 100x Plan-Apochromat NA 1.3 | |
| Filterset GFP (for Alexa-488) | Horiba | XF100-3 | |
| Filterset Cy3 (for TexasRed) | Horiba | XF101-2 | |
| beta-casein | Sigma | C6905-1G | |
| confocal microscope | Nikon Eclipse TE 2000-E | D-Eclipse C1 confocal head | |
| Objective | Nikon | Plan Fluor 100× NA1.3 | |
| matlab | Mathworks | for image processing and analysis of the current traces |
Referências
- Schwille, P. Bottom-Up Synthetic Biology: Engineering in a Tinkerer’s World. Science. 333 (6047), 1252-1254 (2011).
- Aimon, S., et al. Membrane Shape Modulates Transmembrane Protein Distribution. Developmental Cell. 28 (2), 212-218 (2014).
- Roux, A., et al. Membrane curvature controls dynamin polymerization. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (9), 4141-4146 (2010).
- Domanov, Y. A., et al. Mobility in geometrically confined membranes. Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (31), 12605 (2011).
- Sorre, B., et al. Curvature-driven lipid sorting needs proximity to a demixing point and is aided by proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (14), 5622-5626 (2009).
- Faris, M. D. E. A., et al. Membrane Tension Lowering Induced by Protein Activity. Physical Review Letters. 102 (3), 038102 (2009).
- Streicher, P., et al. Integrin reconstituted in GUVs: A biomimetic system to study initial steps of cell spreading. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) – Biomembranes. 1788 (10), 2291-2300 (2009).
- Walde, P., Cosentino, K., Engel, H., Stano, P. Giant Vesicles: Preparations and Applications. ChemBioChem. 11 (7), 848-865 (2010).
- Liu, A. P., Fletcher, D. A. Biology under construction: in vitro reconstitution of cellular function. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10 (9), 644-650 (2009).
- Sens, P., Johannes, L., Bassereau, P. Biophysical approaches to protein-induced membrane deformations in trafficking. Current Opinion in Cell Biology. 20 (4), 476-482 (2008).
- Pautot, S., Frisken, B. J., Weitz, D. A. Production of Unilamellar Vesicles Using an Inverted Emulsion. Langmuir. 19 (7), 2870-2879 (2003).
- Stachowiak, J. C., et al. Unilamellar vesicle formation and encapsulation by microfluidic jetting. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (12), 4697-4702 (2008).
- Reeves, J. P., Dowben, R. M. Formation and properties of thin-walled phospholipid vesicles. Journal of Cellular Physiology. 73 (1), 49-60 (1969).
- Angelova, M. I., Soléau, S., Méléard, P., Faucon, F., Bothorel, P. Preparation of giant vesicles by external AC electric fields. Kinetics and applications. Trends in Colloid and Interface Science VI. 89, 161-176 (1992).
- Bagatolli, L. A., Pott, T. Giant Unilamellar Vesicle Electroformation. Methods in Enzymology. 465, 161-176 (2009).
- Horger, K. S., Estes, D. J., Capone, R., Mayer, M. Films of Agarose Enable Rapid Formation of Giant Liposomes in. Solutions of Physiologic Ionic Strength. Journal of the American Chemical Society. 131 (5), 1810-1819 (2009).
- Campillo, C., et al. Unexpected Membrane Dynamics Unveiled by Membrane Nanotube Extrusion. Biophysical Journal. 104 (6), 1248-1256 (2013).
- Kwok, R., Evans, E. Thermoelasticity of large lecithin bilayer vesicles. Biophysical Journal. 35 (3), 637-652 (1981).
- Mathivet, L., Cribier, S., Devaux, P. F. Shape change and physical properties of giant phospholipid vesicles prepared in the presence of an AC electric field. Biophysical Journal. 70 (3), 1112-1121 (1996).
- Weinberger, A., et al. Gel-Assisted Formation of Giant Unilamellar Vesicles. Biophysical Journal. 105 (1), 154-164 (2013).
- Dezi, M., Di Cicco, A., Bassereau, P., Levy, D. Detergent-mediated incorporation of transmembrane proteins in giant unilamellar vesicles with controlled physiological contents. Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (18), 7276-7281 (2013).
- Kahya, N., Pecheur, E. I., de Boeij, W. P., Wiersma, D. A., Hoekstra, D. Reconstitution of membrane proteins into giant unilamellar vesicles via peptide-induced fusion. Biophysical Journal. 81 (3), 1464-1474 (2001).
- Doeven, M. K., et al. Distribution, lateral mobility and function of membrane proteins incorporated into giant unilamellar vesicles. Biophysical Journal. 88 (2), 1134-1142 (2005).
- Girard, P., Prost, J., Bassereau, P. Passive or Active Fluctuations in Membranes Containing Proteins. Physical Review Letters. 94 (8), 088102 (2005).
- Betaneli, V., Petrov, E. P., Schwille, P. The Role of Lipids in VDAC Oligomerization. Biophysical Journal. 102 (3), 523-531 (2012).
- Ruta, V., Jiang, Y., Lee, A., Chen, J., MacKinnon, R. Functional analysis of an archaebacterial voltage-dependent K+ channel. Nature. 422 (6928), 180-185 (2003).
- Jiang, Y., et al. X-ray structure of a voltage-dependent K+ channel. Nature. 423 (6935), 33-41 (2003).
- Aimon, S., et al. Functional Reconstitution of a Voltage-Gated Potassium Channel in Giant Unilamellar Vesicles. PLoS ONE. 6 (10), e25529 (2011).
- Lee, S., Zheng, H., Shi, L., Jiang, Q. -. X. Reconstitution of a Kv Channel into Lipid Membranes for Structural and Functional Studies. Journal of Visualized Experiments. (77), (2013).
- Baykal-Caglar, E., Hassan-Zadeh, E., Saremi, B., Huang, J. Preparation of giant unilamellar vesicles from damp lipid film for better lipid compositional uniformity. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) – Biomembranes. 1818 (11), 2598-2604 (2012).
- Suchyna, T. M., Markin, V. S., Sachs, F. Biophysics and Structure of the Patch and the Gigaseal. Biophysical Journal. 97 (3), 738-747 (2009).
- Hille, B. . Ion Channels of Excitable Membranes. , (2001).
- Finol-Urdaneta, R. K., McArthur, J. R., Juranka, P. F., French, R. J., Morris, C. E. Modulation of KvAP unitary conductance and gating by 1-alkanols and other surface active agents. Biophysical journal. 98 (5), 762-772 (2010).
- Schmidt, D., MacKinnon, R. Voltage-dependent K+ channel gating and voltage sensor toxin sensitivity depend on the mechanical state of the lipid membrane. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (49), 19276-19281 (2008).
- Quemeneur, F., et al. Shape matters in protein mobility within membranes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , (2014).
- Parc, A. L., Leonil, J., Chanat, E. αS1-casein, which is essential for efficient ER-to-Golgi casein transport, is also present in a tightly membrane-associated form. BMC Cell Biology. 11 (1), 1-15 (2010).
- Garten, M., Toombes, G. E. S., Aimon, S., Bassereau, P. Studying Voltage Dependent Proteins with Giant Unilamellar Vesicles in a “Whole Cell” Configuration. Biophysical Journal. 104 (2), 466a (2013).
- Crowe, L. M., Reid, D. S., Crowe, J. H. Is trehalose special for preserving dry biomaterials. Biophysical Journal. 71 (4), 2087-2093 (1996).
