A encefalopatia hipóxico-isquêmica após asfixia perinatal pode ser estudada usando modelos animais. Demonstramos os procedimentos necessários para estabelecer um modelo de leitão de encefalopatia hipóxico-isquêmica neonatal.
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Artigo de método
Um Modelo de Leitão Neonatal encefalopatia hipóxico-isquêmica
Neste artigo
Resumo
Resumo
Asfixia durante o parto, o que faz com encefalopatia hipóxico-isquêmica (HIE), responde por 0,66 milhões de mortes no mundo a cada ano, cerca de um quarto dos 2,9 milhões de mortes neonatais no mundo. Modelos animais de HIE têm contribuído para a compreensão da fisiopatologia no HIE, e puseram em evidência o processo dinâmico que ocorrer em lesão cerebral por asfixia perinatal. Assim, os estudos em animais sugeriram um tempo de janela para estratégias de tratamento pós-insulto. A hipotermia foi testado como um tratamento para HIE em modelos pdiglet e subsequentemente mostrado eficaz em estudos clínicos. Variações do modelo ter sido aplicada no estudo de métodos neuroprotectores adjuvantes e estudos de leitões de xénon e melatonina levaram a fase clínica I e II ensaios 1,2. O modelo porquinho HIE é ainda utilizado para estudos hemodinâmicos e resuscitation- neonatal, bem como em investigações de hipoxia cerebral em um nível celular. No entanto, é um desafio técnicomodelo e variações no protocolo pode resultar ou demasiado leves ou demasiado grave lesão cerebral. Neste artigo, demonstramos os procedimentos técnicos necessários para o estabelecimento de um modelo estável de leitão HIE neonatal. Em primeiro lugar, o leitão recém-nascido (<24 horas de idade, peso médio 1500 g) é anestesiado, entubado, e monitorados em uma instalação comparável à encontrada em uma unidade de terapia intensiva neonatal. Hipóxia-isquémia global é induzida através da redução da fracção de oxigénio inspiratório para atingir hipoxia global, isquemia através de hipotensão e um traço EEG de amplitude plana integrada (aEEG) indicativo de hipoxia cerebral. A sobrevivência é promovida através do ajuste oxigenação de acordo com a resposta aEEG e pressão sanguínea. Lesão cerebral é quantificado pela histopatologia e ressonância magnética após 72 horas.
Introdução
A asfixia perinatal é uma condição aguda e freqüentemente imprevisíveis associado com encefalopatia hipóxico-isquêmica (HIE). O objetivo geral deste protocolo é demonstrar um modelo de sobrevivência dos leitões de encefalopatia hipóxico-isquêmica perinatal. Este modelo pode ser usado para investigar o efeito de vários graus de hipóxia-isquémia no cérebro neonatal e de tratamentos experimentais em neuropatologia, imagem por ressonância magnética e espectroscopia (MRI e de MRS) e biomarcadores em fluidos corporais tais como sangue, fluido cerebroespinal e urina . O modelo também se mostrou útil para investigar o sistema cardiovascular, sistema respiratório, do rim e do....
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Protocolo
O presente protocolo foi aprovado pela Inspecção das Experiências com Animais da Dinamarca. Todos os animais de teste foram anestesiados durante os procedimentos. A reprodução deste protocolo deve ser realizado em conformidade com a ética e orientações nacionais de bem-estar animal, e aprovado por comitês de ética locais.
1. Os animais
- Leitões da raça Landrace Dinamarquês <24 horas de idade, pesando aproximadamente 1.500 - 2.000 g.
2. Anestesia e Manutenção de Fluidos
- Prepare o equipamento necessário para a anestesia (Figura 1): Uma máscara para a administração do s....
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Resultados
Os efeitos da hipóxia-isquémia no cérebro que ocorrem durante o insulto induzida são documentados por gravar o rastreio aEEG. Um representante aEEG traço é mostrado na Figura 6.
Figura 6. Representante traço aEEG. Baixa amplitude devido à hipóxia-isquemia. Por fa.......
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Discussão
Devido à sua complexidade, o modelo descrito só pode ser implementada em instalações credenciadas e com experiência em pesquisa animal. Aprovação por comitês de ética locais deve ser obtida antes do início dos experimentos, e bem-estar animal ideal deve ser garantida em todos os momentos. Como o modelo baseia-se na sobrevivência dos animais do teste, é importante que um ambiente estéril é mantida durante procedimentos invasivos para prevenir infecções.
A escolha da anestesia é importante, po.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer a John Kristensen e Søren Braad Andersen, do Departamento de Comunicação do Hospital Universitário de Aarhus, Dinamarca, por sua ajuda excepcional nas filmagens e edição. A técnica em animais Diana Gyldenløve e a veterinária Birgitte Kousgaard, do Instituto de Medicina Clínica do Hospital Universitário de Aarhus, Dinamarca, por ajudar nos cuidados com os animais. Este estudo foi apoiado pela Fundação Lundbeck, Fundação Laerdal para Medicina Aguda, Fundação de Pesquisa da Região Central da Dinamarca, Fundação Augustinus, Fundação Aase e Ejnar Danielsens, Instituto de Medicina Clínica Hospital Universitário de Aarhus, Fundação Brødrene ....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Manta pediátrica de toque quente | Covidien | 5030840 | |
| Adesivo Apertrue Drape | Barrier | 915447 | |
| Utility Drape (estéril) 75x80 cm | Barrier | 800530 | |
| Neoflon | BD - Luer | 391350 | |
| Laringoscópio | Miller | 85-0045 | |
| Tubo endotraqueal 2,5 mm | Covidien | 111-25 | |
| Tubo endotraqueal 3,0 mm com braçadeira | Unomedical | MM61110030 | |
| Tubo endotraqueal 3,5 mm com braçadeira | Unomedical | MM61110035 | |
| Máquina de anestesia | GE Healthcare | 1009-9002-000 | |
| EEG - eléctrodos/eléctrodo de agulha subdérmica descartável | Cephalon | ACCE120550 | |
| ECG - eletrodos | medtronic | 3010107-003 | |
| ECG-eletrodos para RM | philips | ACCE120550 | |
| Amostrador de sangue arterial - aspirador | Radiômetro médico ApS | 956552 | |
| Poliuretano Cateter de veia umbilical (5 Fr/Ch) | Covidien | 8888160341 | |
| Poliuretano Cateter de veia umbilical (3,5 Fr/ch) | Covidien | 8888160333 | |
| Conjunto de sutura (tamanho 3-0) | Covidien | 8886 623341 | |
| BD Agulha espinhal 0,7x38mm | BD agulhas | 405254 | |
| Gás com 96% de nitrogênio / 4% de oxigênio | Air Liquide | feito sob encomenda | |
| Sistema NeuroMonitor (CFM) Natus | Medical Incorporated | OBM70002 |
Referências
- Chakkarapani, E., et al. Xenon enhances hypothermic neuroprotection in asphyxiated newborn pigs. Annals of. 68, 330-341 (2010).
- Robertson, N. J., et al. Melatonin augments hypothermic neuroprotection in a perinatal asphyxia model. <....
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Reimpressões e permissões
