Um método simples e barato para a determinação da sensibilidade Fria e Adaptação no Mice

Resumo

O Ensaio Plantar a Frio (CPA) mede a capacidade de resposta ao frio entre 30 °C e 5 °C e também pode medir a adaptação ao frio. Este protocolo descreve como usar o CPA para medir a hipersensibilidade ao frio, analgesia e adaptação em camundongos.

Resumo

A hipersensibilidade ao frio é um problema clínico grave, afetando um amplo subconjunto de pacientes e causando reduções significativas na qualidade de vida. O ensaio plantar frio permite a avaliação objetiva e barata da sensibilidade ao frio em camundongos e pode quantificar tanto a analgesia quanto a hipersensibilidade. Os ratos são aclimatados em uma placa de vidro e uma pelota de gelo seco comprimido é mantida contra a superfície de vidro sob a pata traseira. A latência para retirada do vidro de resfriamento é usada como uma medida de sensibilidade ao frio.

A sensação de frio também é importante para a sobrevivência em regiões com mudanças sazonais de temperatura e, para manter a sensibilidade, os animais devem ser capazes de ajustar seus limiares de resposta térmica para corresponder à temperatura ambiente. O Cold Plantar Assay (CPA) também permite o estudo da adaptação às mudanças na temperatura ambiente, testando a sensibilidade ao frio de camundongos em temperaturas que variam de 30 °C a 5 °C. Os ratos são aclimatados conforme descrito acima, mas a placa de vidro é resfriada até a temperatura inicial desejada usando caixas de alumínio (ou pacotes de papel alumínio) cheias de água quente, gelo úmido ou gelo seco. A temperatura da placa é medida no centro usando uma sonda de termopar tipo T de filamento. Quando a placa atingir a temperatura inicial desejada, os animais são ensaiados conforme descrito acima.

Este ensaio permite testar camundongos em temperaturas que variam de inócuas a nocivas. O CPA produz respostas comportamentais inequívocas e consistentes em camundongos não feridos e pode ser usado para quantificar tanto a hipersensibilidade quanto a analgesia. Este protocolo descreve como usar o CPA para medir a hipersensibilidade ao frio, analgesia e adaptação em camundongos.

Introdução

Medir a capacidade de resposta fria em roedores é importante para melhorar a compreensão dos potenciais mecanismos de sensibilidade frio em seres humanos, tanto em condições normais e patológicas. The Cold Plantar Assay (CPA), originalmente desenvolvido há vários anos ^um, é projetado para gerar, respostas inequívocas murino comportamentais reprodutíveis a um estímulo frio entregue na RT. Mais recentes melhorias deste ensaio permitiu a medida reprodutível de sensibilidade frio a uma vasta gama de temperaturas ^{de 2.} Ambas as versões também são projetados para ser relativamente alto rendimento, e barato de usar.

Uma gra....

Protocolo

Todos os protocolos de mouse estavam de acordo com os institutos nacionais de saúde e orientações foram aprovadas pelo Comitê de animal Estudos da Escola de Medicina da Universidade de Washington (St. Louis, MO).

1. Preparando a Placa e Recintos Testing

1. Limpar a superfície do vidro.
2. Segurar a sonda termopar filamento do tipo T à superfície no meio da placa de vidro com fita adesiva de laboratório.
3. Colocar o animal independente sobre a placa de vidro em uma única linha ao longo do meio da placa.
4. Passe a sonda termopar através do cerco animal centro e ligar para o registrador de dados. Vire o registr....

Resultados

As respostas comportamentais induzidos de ratinhos a partir de 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C, e 12 ° C são altamente reprodutível (Figura 4A) ^20. A fim de medir o estímulo frio sendo gerado sob a pata traseira, os ratos foram anestesiados com uma mistura de cetamina / xilazina / acepromazina e cocktail suas patas foram assegurados no vidro na parte superior de um termopar de tipo T filamento (Figura 4B) ^20. O vidro foi arrefecida ou aquecida para a faixa de teste desejada.......

Discussão

O CPA pode ser usado para avaliar a sensibilidade ao frio e a adaptação ao frio em camundongos. Ele fornece uma maneira acessível e eficiente de medir as respostas ao frio em animais não contidos e aclimatados em uma ampla variedade de faixas de temperatura. Ele também fornece uma resposta comportamental inequívoca com uma variável de saída facilmente quantificada e analisada. Já foi usado para avaliar alterações na sensibilidade ao frio induzidas por inflamação¹, lesão neuropática¹, analgésicos.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Sonda termopar tipo T	Physitemp	IT-24p	Usado para medir a temperatura da superfície do vidro (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)Placa de
vidro	Empresa local de vidro (em St. Louis, Stemmerich Inc)		Usamos vidro pirex (flutuador de borosilicato). Nosso laboratório geralmente usa 1/4'', mas 3/16'' e 1/8'' também são úteis
Registrador de dados térmicos	Extech	EA15	Thermologger para acompanhar a temperatura do vidro (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 ml Seringa	BD	309657	A parte superior é cortada e o gelo seco é comprimido na seringa para gerar uma sonda fria
Computador	Se estiver usando o registrador Extech, qualquer caixa de alumínio funcionará
de oficina			têm 3' de comprimento, 4,5'' de largura e 3'' de altura com uma tampa selada.  Há um furo de 1/2 '' perfurado em um lado curto de cada caixa, perto do fundo. Esses orifícios são preenchidos com torneiras de borracha quando as caixas são preenchidas com gelo úmido ou água quente.
Circulador de água aquecida	VWR		Qualquer modelo de circulador de água com bomba funcionará
Agulha de 21 G	BD	305165	O tamanho exato da agulha não é importante
Temporizador			Qualquer temporizador manual funcionará
Espelho			Qualquer espelho plano funcionará

As caixas de máquinas da Universidade de Washington em St. Louis manual