Quantificação de Proteção Neurovascular sequência repetitiva Hypoxic Pré-condicionamento e Transient Oriente oclusão da artéria cerebral em ratos

Katherine Poinsatte; Uma Maheswari Selvaraj; Sterling B. Ortega; Erik J. Plautz; Xiangmei Kong; Jeffrey M. Gidday; Ann M. Stowe

doi:10.3791/52675

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Quantificação de Proteção Neurovascular sequência repetitiva Hypoxic Pré-condicionamento e Transient Oriente oclusão da artéria cerebral em ratos

13.5K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/52675

⸱

4 de maio de 2015

Katherine Poinsatte¹ , Uma Maheswari Selvaraj¹ , Sterling B. Ortega¹ , Erik J. Plautz¹ , Xiangmei Kong¹ , Jeffrey M. Gidday² , Ann M. Stowe¹

¹Department of Neurology and Neurotherapeutics, University of Texas Southwestern Medical Center, ²Department of Neurological Surgery, Washington University School of Medicine

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve o pré-condicionamento hipóxico repetitivo ou breves exposições à hipóxia sistêmica que reduzem os volumes de infarto e a ruptura da barreira hematoencefálica após oclusão transitória da artéria cerebral média em camundongos. Ele também detalha a quantificação dupla do volume do infarto e da ruptura da barreira hematoencefálica após o AVC para avaliar a eficácia da proteção neurovascular.

Resumo

Modelos animais experimentais de acidente vascular cerebral são ferramentas inestimáveis para a compreensão do AVC e desenvolvendo estratégias de tratamento mais eficazes. Um protocolo de 2 semanas para o pré-condicionamento repetitivo hipóxica (RHP) induz a proteção a longo prazo contra a lesão do sistema nervoso central (SNC) em um rato modelo de acidente vascular cerebral isquêmico focal. RHP consiste em 9 exposições estocásticos a hipoxia, que variam em termos de duração (2 ou 4 h) e intensidade (8% e 11% de O _2). RHP reduz os volumes de enfarte, barreira sangue-cérebro (BBB) uma ruptura, e a resposta inflamatória pós-derrame durante semanas após a última exposição a hipoxia, sugerindo uma indução de longo prazo de um fenótipo do SNC de protecção endógena. A metodologia para a quantificação dual de volume do enfarte e a certificação perturbação é eficaz na avaliação da protecção neurovascular em ratinhos com RHP ou outros neuroprotectores putativos. Camundongos adultos machos Swiss Webster foram pré-condicionados por RHP ou exposições de duração equivalente a 21% de O (ou seja, sala de ar). A oclusão da artéria 60 min transitória cerebral média (tMCAO) foi induzida duas semanas após a última exposição hipóxica. Tanto a oclusão e reperfusão foram confirmados por transcraniana dopplerfluxometria a laser. Vinte e duas horas após a reperfusão, Azul de Evans (EB) foi administrado por via intravenosa através de uma injecção na veia da cauda. 2 horas mais tarde, os animais foram sacrificados por overdose e secções do cérebro foram corados com isoflurano 2,3,5- cloreto de trifeniltetrazólio (TTC). Os volumes de enfarte foram então quantificadas. Em seguida, EB foi extraído do tecido ao longo de 48 horas para determinar BBB interrupção após tMCAO. Em resumo, RHP é um protocolo simples, que pode ser replicado, com um custo mínimo, para induzir protecção endógena neurovascular a longo prazo de uma lesão acidente vascular cerebral em ratos, com o potencial de translação para outros estados de doença pró-inflamatórias baseados em CNS e sistémicas.

Introdução

Como a principal causa de incapacidade em adultos e a quarta principal causa de morte, acidente vascular cerebral é um dos estados patológicos mais debilitantes que afectam a população adulta dos Estados Unidos. ¹ Os modelos animais de acidente vascular cerebral permitir a investigação experimental de novos métodos de reduzir a lesão isquémica e melhorar a recuperação pós-acidente vascular cerebral. Uma nova avenida para tal investigação translacional é pré-condicionamento. Pré-condicionamento é o uso intencional de um estímulo não prejudicial para reduzir a lesão a partir de uma subsequente e mais grave, ferimento. ² o pré-condicionamento hipóx....