In Vivo Imaging and Rastreamento de Tecnécio-99m Rotulado de Medula Óssea Células-Tronco Mesenquimais em Equine Tendinopatia

Resumo

Este protocolo descreve a radiomarcação de células-tronco mesenquimais equinas e sua implantação em lesões tendinosas no cavalo, a fim de determinar a sobrevivência celular e a distribuição tecidual usando cintilografia gama.

Resumo

Recentes avanços na aplicação de células-tronco mesenquimais da medula óssea (BMMSC) para o tratamento de lesões de tendões e ligamentos no cavalo sugerem melhorou medidas de resultados em ambos os estudos experimentais e clínicos. Embora o BMMSC está implantado no interior da lesão do tendão em grandes números (geralmente 10 - 20 milhões de células), apenas um número relativamente pequeno sobrevivência (<10%), embora estes podem persistir por até 5 meses após a implantação. Esta parece ser uma observação comum em outras espécies onde BMMSC foram implantados em outros tecidos e é importante para entender quando ocorre esta perda, quantas sobreviver ao processo de implantação inicial e se as células são apagadas em outros órgãos. Acompanhando o destino das células pode ser conseguida por radiomarcação do BMMSC antes da implantação que permite não invasiva in vivo de imagens de localização da célula e a quantificação do número de células.

Este protocolo descreve uma célula labeling procedimento que usa Tecnécio-99m (Tc-99m), e acompanhamento destas células após a implantação em tendões flexores de feridos em cavalos. Tc-99m é uma (t _1/2 de 6,01 h) do isótopo de vida curta que emite raios gama e podem ser internalizados pelas células na presença do composto lipofílico hexametilpropilenoamina oxima (HMPAO). Essas propriedades tornam ideal para uso em clínicas de medicina nuclear para o diagnóstico de muitas doenças diferentes. O destino das células marcadas podem ser seguidas no curto prazo (até 36 horas) por cintigrafia gama para quantificar tanto o número de células retidos na lesão e distribuição das células nos pulmões, tireóide e outros órgãos. Esta técnica é uma adaptação da rotulagem dos leucócitos do sangue e pode ser utilizado para imagem BMMSC implantado em outros órgãos.

Introdução

Estratégias regenerativos para a reparação dos tecidos doentes ou danificados são baseados em células estaminais multipotentes derivadas de uma variedade de tecidos e implantados na área afectada. Os recentes avanços na aplicação das autólogo BMMSC para o tratamento do tendão e lesões ligamentares no cavalo têm mostrado melhorar as medidas de resultado, tanto experimental ^1-5 e estudos clínicos ^6. O cavalo é um modelo particularmente atraente para avaliar a eficácia de células-tronco tratamentos relacionados porque ele sofre de idade e overstrain lesões relacionadas com os tendões do membro anterior distal, é um animal atlético, e é uma facilita....

Protocolo

Os casos aqui descritos foram realizados seguinte permissão de Ética concedidas pelo Comité de animal Ética e Bem-Estar da Colegio de Veterinarios de Málaga, em Espanha, e do Royal Veterinary College, North Mymms, Reino Unido Os procedimentos utilizados nos cavalos são baseados em protocolos aprovados que são utilizado na clínica em cavalos que recebem terapias baseadas células-tronco que inclui sedação, aspiração de medula óssea, a injeção intra-tendinosa, perfusão regional, injecção intravenosa, pós-tratamento processual e dor gestão e monitorização após a implantação.

1. As modalidades-chave a ser feitas com antecedência

1. Pro....

Resultados

Tc-99m-HMPAO incorporação BMMSs não afeta negativamente a sua capacidade de aderir à cultura de tecidos de plástico e enquanto eles mostram capacidade de proliferação para formar monocamadas (Figura 1) que não tem completamente determinado se as taxas de proliferação ou outros fenótipos celulares são afetados. A sua morfologia é semelhante às células não marcadas com uma forma típica de fuso. A eficiência de marcação celular (isto é., A captação do marcador) tipicamente varia desde cerca de 1,5.......

Discussão

Além de medula óssea, as células estaminais isoladas a partir de fontes tais como o tecido adiposo são adequados para marcação com este protocolo. Além disso, as células de um estado congelado pode ser revivido e expandidas em cultura para os números desejados para estudos de rotulagem ^12.

Um factor crítico que determina a eficiência de marcação do BMMSC é o tempo entre a eluição do Tc-99m a partir do gerador de molibdénio no radiopharmacy, Preparação de Tc-99m-HMPAO e uso do radi.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tecnécio99m			Por favor, pergunte ao fornecedor local de radiação de ionização de acordo com os requisitos legais.  O isótopo deve ser usado dentro de 2 horas após a eluição do gerador de molibdênio-99
Ceretec - Hexametilpropilenoamina oxima (HMPAO)	GE HealthCare		Informe-se diretamente com GE HealthCare
Microfuge, Minispin/Minispin Plus	Ependorf	22620100
18 G e 19 G Needles	Terumo Medical	NN-1838R (18 G);                 NN1938R (19 G)
Seringas de 1 ml e 2 ml	Scientific Laboratory Supplies Ltd	SYR6200 (1 ml); SYR6003 (2 ml)
Tubos de microcentrífuga 1,5 ml	Greiner Bio-One Ltd	616201
PBS - Solução salina tamponada com fosfato	LifeTechnologies	14190
Cotonetes de gaze estéril	Shermond Ltd	UNG602
Bandagem autoaderente CoflexVet	Andover Healthcare, Inc.	3540RB-018
Software de imagem de ultrassom	Scion Image, Scion Corporation, EUA
MicasXplus Software de processamento de cintilagem	Bartec Technologies Ltd		http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html
Contador de isótopos de campo para monitoramento de isótopos	John Caunt Reino Unido	GMS1800a	http://www.johncaunt.com/
Contador de poços para medições de isótopos, calibrador de dose	Capintec Southern Scientific	CRC-25R