चूहा के पार्श्व पूंछ नस से रक्त नमूने
Summary
Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.
Abstract
Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, proteins, and glucose, yet the composition of the blood is dynamically regulated and easily perturbed. One factor that can change the blood composition is the stress response triggered by the sampling procedure, which can contribute to variability in the measures of interest. Here we describe a procedure for blood sampling from the lateral tail vein in the rat. This procedure offers significant advantages over other more commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, without anesthesia or analgesia. Additionally, it can be used to obtain large volume samples (upwards of 1 ml in some rats), and it may be used repeatedly across experimental days. By minimizing the stress response and pain resulting from blood sampling, measures can more accurately reflect the true basal state of the animal, with minimal influence from the sampling procedure itself.
Introduction
खून से प्राप्त Biomarkers उपयोगी नैदानिक, भविष्य कहनेवाला प्रदान करते हैं, और हृदय रोग 1, कैंसर विज्ञान 2, और मनोरोग बीमारी 3 सहित कई चिकित्सीय संदर्भों में उपायों, stratifying। उन्होंने यह भी भूख, सूजन, या तनाव वर्तमान की डिग्री सहित, एक जीव की "राज्य" का आकलन करने के लिए बुनियादी विज्ञान के क्षेत्र में इस्तेमाल किया जा सकता है। इस तरह के उपाय या नमूना प्राप्त किया जाता है कि दिन के समय और विषयों के लिंग सहित हित का सवाल है, के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है और नहीं है कि चर से प्रभावित किया जा सकता है। यह भी रक्त नमूने प्रक्रियाओं के दौरान ही प्रेरित तनाव से प्रभावित किया जा सकता है। तनाव हार्मोन और दर्द की धारणा तेजी से रक्त की संरचना बदल सकते हैं।
चूहे सबसे अधिक इस्तेमाल किया प्रयोगशाला जानवर हैं, और कई तरीकों रक्त संग्रह के लिए विकसित किया गया है। रक्त नमूने का आदर्श तरीका न्यूनतम physiologica होनी चाहिएजानवर पर एल प्रभाव, कोई संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है, तेजी से और बार-बार नमूना लेने की अनुमति देते हैं, और कई बहाव के अनुप्रयोगों के लिए पर्याप्त रक्त की मात्रा प्रदान करते हैं। इस तरह इन मानदंडों को पूरा नहीं करते गले नस या पूंछ टिप विच्छेदन की कैथीटेराइजेशन के रूप में रक्त एकत्रित करने के लिए लोकप्रिय तकनीक।
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य, संज्ञाहरण की आवश्यकता नहीं है, कम तनावपूर्ण है कि चूहों में इस्तेमाल के लिए एक रक्त नमूना तकनीक का वर्णन करने के लिए है एक ही विषय के भीतर अनेक रक्त संग्रह के लिए अनुमति देता है, और कई assays के किया जा सकता है कि इस तरह के एक अपेक्षाकृत बड़े नमूना मात्रा प्रदान करता है एक भी नमूना पर। इस पद्धति का लक्ष्य न्यूनतम भारी तनाव की प्रतिक्रिया से प्रभावित कर रहे हैं कि रक्त के नमूने प्राप्त करने के लिए है।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ, हम अन्य आमतौर पर इस्तेमाल किया तकनीकों से अधिक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है जो एक चूहे से एक खून का नमूना प्राप्त करने के लिए एक त्वरित और आसान प्रक्रिया का वर्णन। सबसे पहले, यह गले नस या retroorbital साइनस से नमूने के साथ इसके विपरीत, संज्ञाहरण की आवश्यकता नहीं है। रक्त के नमूनों व्यवहार प्रक्रिया आसपास के एकत्र कर रहे हैं जब यह सीखने और स्मृति 4,5 के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं, क्योंकि एनेस्थेटिक्स के प्रशासन अवांछनीय है। दूसरा, यह इस तरह के saphenous या पृष्ठीय पेडल नसों से संग्रह के रूप में अन्य venipuncture तकनीक, की तुलना में बड़ा खून संस्करणों इकट्ठा करने की क्षमता प्रदान करता है। रक्त की 1.5 मिलीलीटर अप करने के लिए यहाँ वर्णित तकनीक का प्रयोग एक ही समय बिंदु पर एक चूहे से एकत्र किया जा सकता है, आसानी से एकाधिक assays के समानांतर में चलाने के लिए अनुमति देता है एक मात्रा। अंत में, इस प्रक्रिया पूंछ टिप विच्छेदन या retroorbital खून बह रहा है की तुलना में ऊतकों को नुकसान के लिए क्षमता को कम करता है। इस प्रक्रिया का उपयोग पशु डब्ल्यू के साथ अनुपालन की सुविधाelfare अधिनियम और जानवरों पर प्रदर्शन प्रयोगशाला प्रक्रिया से परिणाम है कि दर्द और संकट को कम करने की आवश्यकता होती है जो प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड।
यह इस विधि के लिए नए जांचकर्ताओं प्रायोगिक पशुओं रोका रहे हैं कि समय को कम करने के क्रम में संयम और पूंछ से खून बह रहा तकनीक का अभ्यास की सिफारिश की है। संयम की दीक्षा से कम से कम 3 मिनट में एकत्र रक्त इष्टतम परिणाम प्रदान करता है।
यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल प्रति सप्ताह 1 से 4 बार नमूना लेने के लिए प्रयोग किया जाता है, लेकिन दिन में दो बार से अधिक नहीं हो सकता है। दोहराया रक्त संग्रह का प्रदर्शन किया जा सकता है, पूंछ के आधार से ऊपर की तरफ आगे बढ़ अलग नमूना साइटों का इस्तेमाल किया जाना चाहिए, और छोड़ दिया और सही पूंछ नसों नमूना साइटों के रूप में alternated किया जाना चाहिए। कृन्तकों की कुल रक्त की मात्रा उनके शरीर के वजन के 6-7% है, और कुल रक्त की मात्रा का कोई अधिक से अधिक 15% एक 2 सप्ताह की अवधि के भीतर एकत्र किया जाना चाहिए। सीरमया प्लाज्मा एकत्र नमूना मात्रा का लगभग 40-60% शामिल हैं।
कुछ मामूली संशोधनों के साथ यहाँ वर्णित के रूप में पार्श्व पूंछ नसों के माध्यम से रक्त नमूने भी माउस में प्रदर्शन किया जा सकता है। सबसे पहले, केवल छोटे गेज (27 जी) कैथेटर इस्तेमाल किया जा सकता है। दूसरा, यह चूहों को स्थिर करने के लिए, बल्कि एक कपड़े में लपेटकर, की तुलना में एक ट्यूब restrainer उपयोग करने के लिए सिफारिश की है। अवअधोहनुज संवहनी बंडल (200-500 μl) की venipuncture माउस का प्रयोग कर से प्राप्त किया जा सकता है कि रक्त की मात्रा सुरक्षित रूप से पूंछ नस (200 μl अधिकतम) से एकत्र किया जा सकता से अधिक है। अवअधोहनुज संवहनी बंडल से रक्त नमूने न्यूनतम संयम की आवश्यकता है और अधिक रक्त उपज हो सकती है, क्योंकि इस माउस में नमूना लेने के लिए पसंदीदा मार्ग है।
इस प्रक्रिया के अपने न्यूनतम आक्रामक प्रकृति के साथ-साथ किया जा सकता है जो तेज़ी के साथ, यह भी भारी तनाव प्रतिक्रिया 6 से रक्त-आधारित उपायों की संभावित गड़बड़ी को कम करता है।भारी तनाव प्रतिक्रिया interleukins और अन्य प्रतिरक्षा सक्रिय कारकों 7, हाइपोथैलेमस पीयूषिका- अधिवृक्क अक्ष 8 के हार्मोन, सहानुभूति तंत्रिका तंत्र 9 में हार्मोन, ghrelin 10, अंतर्जात नशीले पदार्थों के 11, डोपामाइन सहित कई अणुओं की परिसंचारी स्तर, बदल सकते हैं, और सेरोटोनिन 12। इन अणुओं द्वारा विनियमित इन अणुओं या दूसरों के आराम परिसंचारी उपायों वांछित हैं, यह तनाव जोखिम की शुरुआत के एक मिनट के रूप में कम के भीतर शुरू हो रहा है, जो तनाव की प्रतिक्रिया, कम करने के लिए महत्वपूर्ण है।
तनाव प्रतिक्रियाओं केवल रक्त की संरचना में परिवर्तन, लेकिन यह भी सहानुभूति तंत्रिका तंत्र से बढ़कर ड्राइव के माध्यम क्योंकि vasculature की कसना का रक्त नमूना लेने के लिए एक तकनीकी बाधा का प्रतिनिधित्व नहीं। यह एक तीव्र प्रतिक्रिया तनाव बढ़ते है कि एक चूहे से स्थिर रक्त प्रवाह प्राप्त करने के लिए मुश्किल बढ़ती जा रही हो जाता है। इसलिए, जानवर के संकट राग होना चाहिएतेजी से ब्याज की शारीरिक स्थिति को दर्शाते हैं कि नमूने प्राप्त करने के क्रम में ized।
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम तकनीकी सहायता के लिए वर्जीनिया डोहर्टी और Junmei याओ धन्यवाद। इस शोध एच (R01 MH084966), और अमेरिकी सेना के अनुसंधान कार्यालय और रक्षा एडवांस्ड रिसर्च प्रोजेक्ट्स एजेंसी द्वारा वित्त पोषित किया गया KAG करने के लिए (W911NF-10-1-0059 अनुदान)।
Materials
| Sodium heparin (1000 USP units/ml) | Patternson Veterinary Supply | 25021040010 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | JT Taylor | JT2020-01 | |
| Dermachlor Rinse-Chlorhexadine | Butler Schein | 6356 | Topical antiseptic solution, 2% chlorhexidine gluconate |
| SURFLO Winged Infusion Sets, Terumo, butterfly catheters | VWR Scientific | TESV25BLK | |
| BD Tuberculin 1cc syringes | VWR Scientific | BD309659 | |
| 1.5 ml microcentrifuge tubes | VWR Scientific | 89202-682 | |
| 500 μl microcentrifuge tubes | VWR Scientific | 21150-330 | |
| Scissors, stainless steel, 5" | VWR Scientific | 82027-586 | |
| 500ml plastic beaker | VWR Scientific | 414004-149 | |
| Clean cloth wrap | Butler Schein | 2993 | |
| Velcro tape, .75" width | Monoprice | B004AF9II6 | Hook and loop tape |
| Timer | VWR Scientific | 62344-641 |
Referências
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