Rosa Bengala Fototrombose por imageamento óptico confocal<em&gt; In Vivo</em&gt;: Um Modelo de curso Veículo Individual

Resumo

Aqui, descrevemos uma abordagem de microscopia óptica semi-invasiva para a indução de um coágulo fototrombótico de Rosa Bengala no córtex somatossensorial de um camundongo in vivo. Os aspectos técnicos do procedimento de imagem são descritos desde a indução de um evento fototrombótico até a aplicação e coleta de dados.

Resumo

As técnicas de imagem in vivo aumentaram em utilização devido aos recentes avanços em corantes de imagem e tecnologias ópticas, permitindo a capacidade de visualizar eventos celulares em um animal intacto. Além disso, a capacidade de induzir estados fisiológicos de doenças, como acidente vascular cerebral in vivo, aumenta sua utilidade. A técnica aqui descrita permite a avaliação fisiológica das respostas celulares no SNC após um AVC e pode ser adaptada para outras condições patológicas em estudo. A técnica apresentada usa a excitação a laser do corante fotossensível Rosa Bengala in vivo para induzir um evento isquêmico focal em um único vaso sanguíneo.

O protocolo de vídeo demonstra a preparação de uma janela craniana de crânio fino sobre o córtex somatossensorial em um camundongo para a indução de um evento fototrombótico Rosa Bengala, mantendo a lesão na dura-máter subjacente e no cérebro no mínimo. A preparação cirúrgica é inicialmente realizada sob um microscópio de dissecação com uma plataforma cirúrgica/de imagem feita sob medida, que é então transferida para um microscópio confocal equipado com um adaptador de objetiva invertida. Imagens representativas adquiridas utilizando este protocolo são apresentadas, bem como sequências de lapso de tempo de indução de AVC. Essa técnica é poderosa porque a mesma área pode ser visualizada repetidamente nos dias subsequentes, facilitando estudos longitudinais in vivo de processos patológicos após o AVC.

Introdução

A técnica descrita permite a visualização in vivo de respostas celulares imediatamente após a indução de Rose Bengal fototrombose em um rato intacto. Rosa de Bengala (4,5,6,7-tetracloro-2 ', 4', 5 ', 7'-tetraiodofluorescein) é um corante fotossensível utilizado para induzir apoplexia isquémica em modelos animais (ratinhos e ratos). Na sequência de uma injecção de bolus de RB através da veia da cauda e subsequente iluminação através de um crânio diluído com uma luz laser 564 nm, um trombo é induzida causando um acidente vascular cerebral fisiológico ^1. O método foi originalmente descrito por Rosenblum e El-Sabban em 1977, e mais tar....

Protocolo

Nota: Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso da Universidade do Texas Saúde Science Center San Antonio animal Institucional e foram consistentes com as diretrizes chegar.

1. A anestesia para Cortical Preparação

1. Posicione o mouse em uma câmara de indução com 2-3% isoflurano misturado com o oxigênio para induzir a anestesia. Observe a diminuição da taxa de respiração como o mouse é induzida. Beliscar das garras do mouse para determinar se o mouse está pronto para passar para o cone do nariz. Nota: nível de Anestesia é um passo crítico em qualquer preparação in vivo e os cuidados d....

Resultados

O objectivo deste método foi de induzir um acidente vascular cerebral isquémico em modelos animais (ratinhos e ratos) depois de uma injecção de bolus de RB através da veia da cauda e iluminação posterior de um crânio diluído com uma luz laser de 561 nm. As imagens na Figura 4 demonstram a progressão de formação de coágulo dentro de um único vaso a seguir à irradiação da área a 0, 1, 1,5 e 2 min. Antes da formação do coágulo todo o vaso é branco devido ao fluxo livre Rose Bengal. Após a indução de irradi.......

Discussão

A capacidade de traduzir fisiopatologia curso experimental de animal para aplicação em seres humanos tem sido atormentado com o fracasso. No entanto, a utilização de modelos animais, tais como o modelo fototrombose, permite uma melhor compreensão da patofisiologia acidente vascular cerebral e a exploração de novas abordagens terapêuticas para proporcionar neuroprotecção após um acidente vascular cerebral. Pequenos acidentes vasculares cerebrais corticais e microinfartos produzidos pelo modelo photothrombotic são clinica.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Reagentes
Rose Bengal	Sigma	330000
Isoflurano Anestésico	MWI Veterinary Supply	088-076
Vetbond	1469SB	1469SB
aCSF	126 mM de NaCl, 2,5 mM de KCl, 1,25 mM de NaH2PO4, 2 mM de MgCl2, 2 mM de CaCl2, 10 mM de glicose e 26 mM de NaHCO3 (pH 7,4).
[header]
Tesoura de dissecação	Produtos bioindustriais	500-410
Tesoura de operação 14 cm	Produtos Bioindustriais	12-055
Fórceps Dumont High Tech #5 estilo, reto	Produtos Bioindustriais	TWZ-301.22
LabJack 132X80	Optosigma Co	123-6670
Plataforma para Labjack 8X 8	Optosigma Co	145-1110
Suporte de barra de orelha de configuração estereotáxica	Stoelting/Cyborg	51654
Máquina de anestesia para roedores Labvent Dispomed	DRE, Inc.	15001
Vaporizador de isoflurano Tech IV	DRE, Inc.	34001
F Air Canister	DRE, Inc	80120
Tubo respiratório de circuito de banho	DRE, Inc	86111B
Adaptador de roedores para tubo de banho	DRE, Inc	891000
Regulador O2 para tanques de oxigênio	DRE, Inc	CE001E
Câmara de indução de roedores	DRE, Inc	15004C
Ethicon Silk 6-0; 18 in com agulha P-3	Suture Express	1639G
Objetiva inversor Adaptador óptico Tecnologias			LSM
Broca Foredom Dupla voltagem 110/120	Foredom	134.53
Broca Meisinger 3.9 mm	Meisinger		(Ref#310 104 001 001 009)

de equipamentos