ग्रसनी मेहराब के पूर्व vivo संस्कृति हार्ट और स्नायु progenitors और अपने आला अध्ययन करने के लिए
Summary
Here, we present a protocol to culture pharyngeal arches to study the biology of heart and muscle progenitor cells and their microenvironment.
Abstract
विकासशील भ्रूण की ग्रसनी mesoderm सिर और दिल मांसलता के व्यापक क्षेत्रों के लिए योगदान देता है। हम (भी गिल मेहराब के रूप में जाना जाता है) ग्रसनी मेहराब के साथ सिर और दिल के पूर्वज सेल विकास पूर्व vivo अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास तरीका विकसित किया है। इस विधि का उपयोग करना, हम हाल ही में दूसरी ग्रसनी मेहराब स्वयं renewing दिल पूर्वज होता है और माउस दिल के विकास के दौरान progenitors के विस्तार के लिए एक microenvironment के रूप में कार्य करता है कि वर्णन किया है। मूल कोशिकाओं कट्टर के अंदर समान और प्रशस्त रहते हैं, लेकिन जल्दी से वे कट्टर से बाहर की ओर पलायन के रूप में कार्य cardiomyocytes हो जाते हैं। हम भी पहले ग्रसनी चाप चाप छोड़ने के बाद myotubes को जन्म दे रही मांसपेशी पूर्वज जिसमें सूचना दी। यहाँ, हम विच्छेदन और माउस भ्रूण विकसित करने से पहले और दूसरे ग्रसनी मेहराब के पूर्व vivo संस्कृति के लिए प्रक्रिया को प्रदर्शित करता है। विधि सिर और दिल के पूर्वज / मांसपेशियों देव अध्ययन करने के लिए एक सक्षम बनाता हैcardiomyocyte और विस्तार पूर्व vivo में myotube गठन सहित elopment,।
Introduction
ग्रसनी mesoderm कोशिकाओं दिल के कुछ हिस्सों और ग्रसनी की मांसपेशियों को जन्म दे। भ्रूण के विकास के दौरान, दूसरा दिल क्षेत्र से multipotent हृदय पूर्वज कोशिकाओं ग्रसनी मेसोडर्म से विस्थापित और हृदय बहिर्वाह पथ और सही वेंट्रिकल आबाद है, और उनके असामान्य विकास बारीकी से जन्म दोष और जन्म defect- की जन्मजात हृदय रोग के प्रमुख कारण के साथ जुड़ा हुआ है मनुष्य 1-3 में संबंधित मौतों। हाल के अध्ययनों से ग्रसनी mesoderm mesoderm कार्डियो-craniofacial विकास 4 का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है, जिससे दिल के अलावा, मांसपेशियों सिर करने के लिए योगदान देता है कि प्रदर्शन किया है। इस प्रकार, प्रेरण, प्रसार, और ग्रसनी mesoderm में सिर और दिल के progenitors के भेदभाव सहित विकास की प्रक्रिया में सक्रिय जांच 5-7 के तहत कर रहे हैं।
अभी हाल तक, यह हृदय की मूल कोशिकाओं विस्तार witho गुजरना चाहे अनजान बनेउनके सेलुलर पर्यावरण के बारे में जानकारी की कमी के कारण आंशिक रूप से केन्द्र शासित प्रदेशों के भेदभाव,। हमारे हाल के एक अध्ययन ग्रसनी मेहराब हृदय और मांसपेशियों progenitors के नवीकरण के लिए एक microenvironment के रूप में सेवा और कई हफ्तों से 8 विवो पूर्व संवर्धित किया जा सकता है कि पता चलता है। इस explant विधि कार्डियो-craniofacial पूर्वज पूर्व vivo के विकास का अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास और अद्वितीय अवसर प्रदान करता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस वीडियो में, हम अलग करने और 9.5 दिन पुरानी माउस भ्रूण की पहली संस्कृति और दूसरा ग्रसनी मेहराब को कैसे प्रदर्शित करता है। ग्रसनी मेहराब, पहले मेहराब 8 में दूसरे मेहराब और सिर मांसपेशी पूर्वज अलावे embryo…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank Kwon laboratory members for helpful discussions. This work was supported by grants from NHLBI/NIH (R01HL111198) and Maryland Stem Cell Research Fund (MSCRF).
Materials
| FBS | Hyclone | SH30071.03 | |
| PBS + Ca2 + Mg2 | Corning | 21-030-CV | |
| 10cm petri plates | Fishersci | FB0875712 | |
| Scissor | |||
| Dissection forceps | |||
| Serum Free Media: | |||
| IMDM | Cellgro | 15-016-CV | |
| Ham’s F12 | Cellgro | 10-080-CV | |
| N2-SUPPLEMENT | Gibco | 17502-048 | |
| B27-retinoic acid | Gibco | 12587-010 | |
| 10% BSA (in PBS) à (Invitrogen Cat#. P2489) | Life Sciences | P2489 | |
| 100X Glutamine (Gibco Cat.# 25030-081) | Gibco | 35050-61 | |
| 100X Pen/Strep (Gibco Cat#. 15070-063) | Gibco | 15140-122 | |
Referências
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