Svängningar är grundläggande nätverksegenskaper och moduleras av sjukdom och droger. Studera hjärn slice svängningar tillåter karakterisering av isolerade nät under kontrollerade förhållanden. Protokoll finns för framställning av akut hjärnan skivor för att framkalla CA1 γ svängningar.
Neuronala nätverket svängningar är viktiga inslag i hjärnans aktivitet vid hälsa och sjukdom och kan moduleras av en rad kliniskt använda läkemedel. Ett protokoll är anordnat för att generera en modell för att studera CA1 γ oscillationer (20-80 Hz). Dessa γ oscillationer är stabila under åtminstone 30 minuter och beror på retande och inhiberande synaptisk aktivitet förutom aktivering av pacemaker strömmar. Tetanically stimulerade svängningar har ett antal reproducerbara och lätt kvantifierbara egenskaper inklusive spik räkna, svängning varaktighet, latens och frekvens som rapporterar på nätverksstatus. Fördelarna med de elektriskt stimulerade svängningar innefattar stabilitet, reproducerbarhet och episodisk förvärvet möjliggör robust karakterisering av nätverksfunktion. Denna modell av CA1 γ svängningar kan användas för att studera cellulära mekanismer och att systematiskt undersöka hur nervnätverksaktivitet förändras vid sjukdom och droger.Sjukdomstillstånd farmakologi kan lätt införlivas genom användning av hjärnan skivor från genetiskt modifierade eller interventionell djurmodeller för att möjliggöra val av läkemedel som specifikt riktar sjukdomsmekanismer.
Brain nätverks svängningar förekommer inom olika frekvensband som korrelerar till beteende stater. Hos gnagare hippocampus θ svängningar – är (5 10 Hz) observeras under förberedande beteenden 1,2, medan γ svängningar (20 – 80 Hz) förknippar med olika kognitiva processer, inklusive perception och uppmärksamhet 3,4. Synkron γ nätverksaktivitet är också inblandad i patologin av sjukdomar, såsom epilepsi och schizofreni 5,6. Till exempel är γ oscillationer tros motsvara områden av kortikal epileptiska foci 5,7,8 och skulle kunna användas som markörer för pharmacosensitivity eller motstånd, två viktiga områden för undersökning vid epilepsi forskning 9.
Den hippocampus hjärnan skiva är en modell som har använts i stor utsträckning för att undersöka nätverksaktivitet 10-12. Olika protokoll har utvecklats för att generera γ svängningar i hjärnan skivor som normalt involve farmakologisk modulering såsom låg Mg 2+, 4-aminopyridin (4AP), bikukullin och kainsyra 12-17. Brister i farmakologiskt utlösta svängningar är att de dyker upp slumpmässigt efter drogansökan och inte genereras eller stabila över tiden på ett tillförlitligt sätt. Elektriskt utlöst γ svängningar övervinna många av dessa problem och har också fördelen av att vara temporärt låst till stimulerande händelse möjliggör episodisk registrering och analys. Här ett protokoll beskrivs för att generera CA1 γ svängningar genom att leverera en tetanic stimulans till stratum oriens i hippocampus slice.
En robust metod för att generera CA1 γ svängningar i akut hjärnan skivor beskrivs. De svängningar genererade uppstår från en lokal krets som möjliggör en bättre möjlighet att styra och förstå neurofysiologiska grunden för nätverks svängningar 12. AMPA-receptorer, GABA A-receptorer, I h och T-typ Ca2 + kanaler alla krävs för γ svängningar i den här modellen. Medan lokala CA1 svängningar som beskrivs här kan kraftigt genererade detta beror på att säkerst…
The authors have nothing to disclose.
Supported by APA to RJH, NHMRC program grant 400121 to SP, and NMHRC fellowship 1005050 to SP. CAR acknowledges the support of the ARC (FT0990628) and the DOWD fellowship scheme. The Florey Institute of Neuroscience and Mental Health is supported by Victorian State Government infrastructure funds.
4-(N-Ethyl-N-phenylamino)-1,2- dimethyl-6-(methylamino) pyrimidinium chloride (ZD7288) | Sigma-Aldrich | Z3777 | |
Biuculline | Sigma-Aldrich | 14340 | |
6-cyano-7-nitroquinoxa- line-2,3-dione (CNQX) | Sigma-Aldrich | C127 | |
Nickel | Sigma-Aldrich | 266965 | |
Carbamazepine | Sigma-Aldrich | C4024 | |
(2R)-amino-5-phosphonopentano-ate (APV) | Tocris Bioscience | 0105 | |
Retigabine | ChemPacific | 150812-12-7 | |
Choline-Cl | Sigma Aldrich | C1879-5KG | |
KCl | Sigma Aldrich | P9333-500G | |
NaH2PO4 | Sigma Aldrich | S9638-250G | |
NaHCO3 | Sigma Aldrich | S6297-250G | |
NaCl | Sigma Aldrich | S7653-5KG | |
Glucose | Sigma Aldrich | G8270-1KG | |
CaCl2.2H2O | Sigma Aldrich | 223506-500G | |
MgCl2.6H2O | Sigma Aldrich | M2670-500G | |
Electrode glass | Harvard Apparatus | GC150F-10 | |
Concentric bipolar stimulating metal electrode | FHC | CBBPF75 | |
Digital Isolator | Getting Instruments | Model BJN8-9V1 | |
Model 1800 amplifier | A-M systems | Model 1800 amplifier | |
Digitizer | National Intruments | NI USB-6211 | |
Vibrotome | Leica | VT1200s |