Ingivningsmängder och Fixering metoder som är användbara i Mus Lung Cancer Research

Summary

Målet med detta dokument är att beskriva enkla metoder som i hög grad kommer att hjälpa i installationen och analys av muslungor med lungcancer eller andra sjukdomar. Vi presenterar 3 protokoll för att enkelt och tillförlitligt genomföra lunginstillationer, fixering, och mätningar lungvolym.

Abstract

Förmågan att ingjuta levande medel, celler, eller kemikalier direkt in i lungan utan att skada eller döda mössen är ett viktigt verktyg i lung cancerforskning. Även om det finns ett antal metoder som har publicerats som visar hur man intubation möss för lungmätningar funktion, ingen är utan potentiella problem för snabb luftrör instillation i stora grupper av möss. I föreliggande dokument är en enkel och snabb metod beskrivs som möjliggör en utredare att utföra sådana instillationer på ett effektivt sätt. Metoden kräver inga speciella verktyg eller belysning och kan läras med mycket lite träning. Den involverar anesthetizing en mus, vilket gör ett litet snitt i halsen för att visualisera luftstrupen, och sedan sätta in en intravenös kateter direkt. Den litet snitt snabbt stängd med vävnadslim, och mössen fick återhämta sig. En skicklig student eller tekniker kan göra instillationer i genomsnitt 2 min / mus. När than cancer är etablerad, finns det ofta ett behov av kvantitativ histologisk analys av lungorna. Traditionellt patologer brukar inte bry sig om att standardisera lung inflationen under fixering och analyser bygger ofta på ett poängsystem som kan vara ganska subjektiv. Även om detta kan ibland vara tillräckligt tillfredsställande för grova uppskattningar av storleken på en lungtumör, någon riktig stereologisk kvantifiering av lungstrukturen eller celler kräver en reproducerbar fixering förfarandet och efterföljande mätning lungvolym. Här beskriver vi enkla tillförlitliga förfaranden för både fastställande av lungorna under tryck och därefter noggrant mäta den fasta lungvolym. Det enda kravet är en laboratorie balans som är korrekt över ett område av 1 mg-300 g. De förfaranden som presenteras här på detta sätt kunde avsevärt förbättra förmågan att skapa, behandla och analysera lungcancer hos möss.

Introduction

Av ett antal skäl, lungcancer har inte studerats ingående i mus. Ett skäl till detta är att tillgång till lungan är mycket svårt in vivo och kvantitativ analys av fasta lungor är inte ofta görs. De metoder som beskrivs i detta dokument syftar till att råda bot på denna situation. Målen här är att beskriva enkla metoder som i hög grad kommer att hjälpa i installationen och analys av muslungor med lungcancer eller andra sjukdomar. Även om ingen av dessa metoder är helt nya, har de inte presenteras tillsammans som fristående metoder i förenklat sätt som beskrivs här.

Det har förekommit ett antal manuskript som har beskrivit metoder för intubation av muslungan främst i syfte att göra upprepa lungfunktion eller bronkoalveolärt lavage i enskilda möss i longitudinella studier. Sedan den ursprungliga papper, har det förekommit flera andra tidningar som har beskrivit olika sätt att mouse intubering ^{1 -9.} Även om alla dessa metoder kan användas med framgång, kräver de vanligtvis betydande utbildning, och är ofta inte utan en nontrivial felfrekvens. Dessutom, för att utföra lungmätningar funktion, måste kanylen för att passa i luftstrupen tätt nog så att det inte finns något luftläckage. Emellertid är en annan praktisk användning för intubation för att leverera specifika medel (cancerceller eller andra förolämpningar) eller terapeutiska läkemedel direkt till lungan. Ett sådant förfarande kräver inte ett åtsittande kanyl eller någon sofistikerad lungfunktionsutrustning. Det nya särdrag hos denna metod visas här involverar ett mindre kirurgiskt ingrepp som gör det möjligt för intubering utan någon möjlighet av kanylen in i matstrupen. Denna enkla metod möjliggör framgångsrik intubation med relativt lite utbildning eller erfarenhet. Så många som 30 möss / timme kan behandlas med denna metod med en felfrekvens närmar sig noll.

När than möss är redo att offras, de skadade eller cancer lungorna kan sedan tas bort för histologisk och patologisk analys. Men för att korrekt kvantifiera eventuella histologiska variabler för jämförelse med andra lungorna, är det viktigt att standardisera fixeringsförfaranden och korrekt kvantifiera den fasta lungvolym ^10. Detta dokument beskriver i detalj de enkla rutiner som gör att standardiserade fixeringsförfaranden samt ett sätt att mäta den fasta lungvolym. Volymen är en viktig måttenhet i kvantifieringen av histologi, eftersom utan en sådan volymbestämning, kan endast relativa densiteter mätas ^10. När lungvolymen är emellertid känt, absoluta mätningar av celler och andra strukturella mätningar i lungan kan därefter kvantifieras.

Protocol

Följande protokoll beskriver ett system som fungerar bra i 20-35 g möss. Metoden kan lätt kunna anpassas till större eller mindre möss bara genom att ändra kateterstorleken. Alla djurprotokoll godkändes av Johns Hopkins University Djurvård och användning kommittén. 1. Lunginstillation Välj en kommersiell en tum lång 20 g intravenös kanyl som ska användas för intubering. Ändra kateterspetsen manuellt böja den för att generera en liten krökning vid spets…

Representative Results

Förfarandet beskrivs i det första protokollet inte i sig leda till några allmänna resultat. Den beskriver endast ett mycket tillförlitligt medel för att ingjuta ämnen direkt in i luftstrupen. Figur 7 visar ett exempel på en lunga där trypanblått instillerades med den här beskrivna metoden. Det finns en utbredd fördelning av färgämnet, liknande vad som har setts med andra färgämnen eller spårämnen ges direkt in i luftstrupen eller möss 11,12. Vi har också använt denna meto…

Discussion

De förfaranden som beskrivs här har flera fördelar. Först den nödvändiga utrustningen är enkel och billig. För det andra kan den intubation vara snabbt gjort med få fel. För det tredje, förmågan att fixera lungorna vid ett konstant tryck, och sedan mäta den fasta lungvolym tillåter korrekt kvantifiering av strukturer eller celler i lungan ^10.

En möjlig nackdel för intubation är mindre operation. Detta kan begränsa möjligheten att upprepa proceduren om en ^2:…

Materials

Laboratory Balance	Ohaus	Adventurer Pro Model AV 313	Other balances can be used if they have a range of 1 – 300g
20 g Luer intravenous catheter	Insylte		Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva
500 mL laboratory bottle	Various		Several other possible vendors